一种利用重组Bacillus subtilis全细胞转化胆固醇生成胆甾-4-烯-3-酮的方法

摘要

一种利用重组Bacillus subtilis全细胞转化胆固醇生成胆甾‑4‑烯‑3‑酮的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明首先获得新金色分枝杆菌中胆固醇氧化酶(ChoM)的基因扩增，然后利用pMA5质粒，实现了该基因在模式菌株枯草芽孢杆菌168中的过量表达。本发明构建以胆固醇为底物全细胞转化为方法的高产胆甾‑4‑烯‑3‑酮的枯草芽孢杆菌工程菌株，对该菌株的酶活力及发酵性能进行研究发现胆固醇氧化酶的活力较出发菌株有了明显提高，以0.1％(w/v)胆固醇为底物，全细胞转化24h，底物摩尔转化率达到67％和83％，是出发菌株相对转化率的20和25倍。本发明为微生物一步发酵法生产胆甾‑4‑烯‑3‑酮的工业化提供了有益的指导。

主权项

一种重组枯草芽孢杆菌，其特征是：将重组载体pMA5‑choM1用化学转化法转化菌株Bacillus subtilis 168后获得或者是将重组载体pMA5‑choM2用化学转化法转化菌株Bacillus subtilis 168后获得；重组表达载体pMA5‑choM1或pMA5‑choM2是通过PCR技术获得来源于新金色分枝杆菌的choM1和choM2基因，分别与表达载体pMA5连接构建获得，所述choM1基因序列为SEQ ID No：1，所述choM2基因序列为SEQ ID No：2。