辛芍提取物中有效成分在Caco-2细胞模型中吸收转运量的测定方法

摘要

本发明公开了一种辛芍提取物中有效成分在Caco‑2细胞模型中吸收转运量的测定方法，它是先制备辛芍提取物供试药液；用芍药内酯苷、没食子酸，咖啡酸、灯盏乙素、灯盏甲素制备作为对照品的系列标准溶液；以葛根素配制内标溶液；然后建立人源结肠腺癌细胞系Caco‑2细胞模型；将得到的供试药液和系列标准溶液分别加入Caco‑2细胞模型，加入细胞裂解液裂解细胞后，得到含药的细胞悬液；用UPLC‑MS测定得到的含药的细胞悬液中5个活性成分的吸收量；本发明的实验采用Caco‑2细胞模型结合液质联用技术研究辛芍提取物中5种活性成分的吸收机制，考察这几种成分的摄取、跨膜转运等特点，从细胞水平，提供药物分子的吸收的综合信息。

主权项

辛芍提取物中有效成分在Caco‑2细胞模型中吸收转运量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1：制备辛芍提取物供试药液；步骤2：用芍药内酯苷、没食子酸，咖啡酸、灯盏乙素、灯盏甲素制备作为对照品的系列标准溶液；步骤3：以葛根素配制内标溶液；步骤4：建立人源结肠腺癌细胞系Caco‑2细胞模型；步骤5：将步骤1得到的供试药液和步骤2得到的系列标准溶液分别加入Caco‑2细胞模型，用HBSS并快速清洗三遍细胞单分子层，加入空白细胞裂解液反复冻融裂解细胞，裂解细胞后，分别得到供试品和对照品的含药的细胞悬液；步骤6：用UPLC‑MS测定步骤5中得到的含药的细胞悬液中芍药内酯苷、没食子酸、咖啡酸、灯盏乙素、灯盏甲素5个活性成分的吸收量；步骤7：取步骤5中得到含药的细胞悬液加入内标溶液，加入乙腈沉淀蛋白，涡混和离心处理，取上清液进样分析，测定芍药内酯苷、没食子酸、咖啡酸、灯盏乙素和灯盏甲素的浓度；另取步骤5中得到含药的细胞裂解液以考马斯亮蓝法测定蛋白含量。