一种多肽二硫键的定位方法

摘要

本发明公开了一种多肽二硫键的定位方法，包括：将待测多肽在含二硫键还原剂的溶液环境中部分还原化；对部分还原化的多肽在含多肽变性剂和烷基化试剂的溶液环境中烷基化；对烷基化的多肽在含多肽变性剂和二硫键还原剂的溶液环境中完全还原化；使用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱对产物进行分子量检测；对检测合格的样品进行液质联用串联质谱检测，得到质谱数据；将质谱数据转换成质谱鉴定软件所兼容的数据格式，然后使用质谱鉴定软件将质谱数据与参考多肽序列数据库进行搜索比对，计算出多肽二硫键的连接位置及不同连接形式存在的比例。该方法样本量需求小、纯度要求较低、操作简单、重现性高、解析难度小、结果准确度高、通量高且成本低。

主权项

一种多肽二硫键的定位方法，其特征在于，所述方法包括：1）将含有二硫键的待测多肽在含二硫键还原剂的溶液环境中进行部分还原化处理，得到部分还原化的待测多肽；2）对所述部分还原化的待测多肽在含多肽变性剂和烷基化试剂的溶液环境中进行烷基化处理，得到部分还原烷基化的待测多肽；3）对所述部分还原烷基化的待测多肽在含多肽变性剂和二硫键还原剂的溶液环境中进行完全还原化处理；4）使用基质辅助激光解吸电离‑飞行时间质谱对步骤3）的产物进行样品的分子量检测，若出现部分还原状态对应分子量的质谱峰即为合格；5）对所述合格的样品进一步进行液质联用串联质谱检测，得到用于质谱分析的质谱数据；6）将所述质谱数据转换成质谱鉴定软件所兼容的数据格式，然后使用质谱鉴定软件将转换好格式的质谱数据与参考多肽序列数据库进行搜索比对，得到各种不同位置半胱氨酸残基烷基化修饰位点的多肽鉴定信息，根据多肽的序列、修饰位点、强度、色谱出峰时间及组合，精确计算出多肽二硫键的连接位置及不同连接形式存在的比例。