一种蛋白质双向电泳方法及其应用

摘要

本发明公开了一种蛋白质双向电泳方法，包括第一向的等电聚焦电泳和第二向的SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳，分别对聚焦电泳的水化条件和电泳条件进行了改进，包括利用水化液对胶条进行水化，得到水化好的胶条，且水化好的胶条pH为4‑7，其中每100mL水化液中含有以下组分：41‑42.5g的尿素、15‑16g的硫脲、2‑2.2g的CHAPS、0.9‑1.1g的DTT、2‑2.2g的IPG Buffer、0.002‑0.003g的溴酚兰，且水化液的溶剂为ddH₂O；等电聚焦电泳的电压和时间采用如下设置：S1：50v，10h；S2：250v，3h；S3：500v，3h；S4：1000v，1h；S5：8000v，3h；S6：8000v，6‑6.5h。该方法在检测淀粉液化芽孢杆菌稳定期菌体细胞中全蛋白分布的应用时，双向电泳图谱分辨率高、重复性好。

主权项

一种蛋白质双向电泳方法，其特征在于，包括：步骤1，制备蛋白质样品；步骤2，等电聚焦电泳，具体包括：利用水化液对胶条进行水化，得到水化好的胶条，且水化好的胶条pH为4‑7，其中每100mL水化液中含有以下组分：41‑42.5g的尿素、15‑16g的硫脲、2‑2.2g的CHAPS、0.9‑1.1g的DTT、2‑2.2g的IPG Buffer、0.002‑0.003g的溴酚兰，且水化液的溶剂为ddH₂O；将水化好的胶条与电泳设备接触，设置等电聚焦电泳运行条件，并进行蛋白质样品的上样，最后进行等电聚焦电泳，得到聚焦好的胶条，其中等电聚焦电泳的电压和时间采用如下设置：S1：50v，10h；S2：250v，3h；S3：500v，3h；S4：1000v，1h；S5：8000v，3h；S6：8000v，6‑6.5h；步骤3，将得到聚焦好的胶条进行平衡，然后进行SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳，得到含有蛋白质的电泳凝胶；步骤4，采用银染染色的方法对含有蛋白质的电泳凝胶进行染色，最终获得双向电泳凝胶。