一种二氧化锰纳米片模拟氧化物酶检测还原性生物分子的方法

摘要

一种二氧化锰纳米片模拟氧化物酶检测还原性生物分子的方法，氧化锰纳米片模拟氧化物酶能够催化氧化3,3',5,5'‑四甲基联苯胺TMB、2,2‑联氮‑二(3‑乙基‑苯并噻唑‑6‑磺酸)二铵盐ABTS和邻苯二胺OPD等底物，使其分别由无色变成蓝色、绿色和橙色，同时，二氧化锰纳米片与谷胱甘肽、抗坏血酸等还原性生物分子能灵敏和选择性的发生氧化还原反应，进而改变TMB、ABTS和OPD等底物的氧化产物浓度，之后，可以通过比色分析法定量检测谷胱甘肽和抗坏血酸等还原性生物分子；该方法具有操作简单、灵敏度高、重现性好和选择性高等特点；其对谷胱甘肽的检测线性范围为1‑15μM，检出限为0.3μM；对抗坏血酸的检测线性范围3‑100μM，检出限为0.8μM，该方法也可用于各种多酚类化合物的检测。

主权项

一种二氧化锰纳米片模拟氧化物酶检测还原性生物分子的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将已知浓度还原性生物分子标准溶液加入到二氧化锰纳米片溶液和醋酸钠缓冲溶液的混合溶液中，室温下作用时间不小于10min；(2)将步骤(1)最终得到的混合溶液加入到氧化物酶底物溶液中，两者体积比为7:2，氧化时间不小于5min；(3)分别以OPD、TMB和ABTS为底物时，用双光束紫外可见分光光度计检测步骤(2)最终所得溶液在450/650/734nm处吸光度值，记为A。以超纯水代替已知浓度还原性生物分子标准溶液作为空白实验，其450/650/734nm处吸光度值记为A₀；(4)以吸光度净信号△A＝A₀‑A作为定量指标，绘制该还原性生物分子的标准曲线，得到线性方程及检测线性范围和检出限。(5)将待测还原性生物分子溶液重复上述步骤(1)、(2)、(3)，得到待测还原性生物分子在450/650/734nm处吸光度值，根据步骤(4)线性方程计算待测还原性生物分子溶液的浓度。