一种恶臭假单胞菌基因敲除和基因组精简系统

摘要

本发明公开了一种恶臭假单胞菌基因敲除和基因组精简系统，属于微生物基因工程领域。本发明的恶臭假单胞菌基因敲除系统和基因组精简系统巧妙结合了自杀质粒敲除系统和位点特异性重组系统，大大提高了二轮筛选正确率，高达90％以上，在用于长达69个基因的基因簇的敲除时仍然表现出90％以上正确率。本发明实现基因簇的连续敲除，操作简便，高效，正确率高，成本低。本发明为精简优化恶臭假单胞菌基因组奠定了分子基础，有利于实现合成生物学底盘细胞的高效构建。

主权项

一种恶臭假单胞菌基因敲除和基因组精简系统，其特征在于，包括：1)核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的模板质粒pWJW101；2)核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示的表达质粒pWJW102、pWJW103；其中，表达质粒pWJW102携带编码Cre重组酶和蔗糖果聚糖酶SacB的基因，Kan抗性；表达质粒pWJW103携带编码Cre重组酶和蔗糖果聚糖酶SacB的基因，Gm抗性。