eGFP标记GPR120阳性细胞的小鼠模型构建方法

摘要

eGFP标记GPR120阳性细胞的小鼠模型构建方法，设计针对目的位点基因组的guideRNA靶序列，并进行体外转录获得针对该基因的guideRNA；构建donor DNA重组质粒；将guideRNA及donor DNA重组质粒进行受精卵注射获得F0代小鼠，对F0代小鼠的基因型进行鉴定获得正确同源重组的阳性F0代小鼠；将F0代小鼠与野生型小鼠交配获得F1代小鼠，对F1代小鼠的基因型进行鉴定获得正确同源重组的阳性F1代小鼠；F1中阳性转基因小鼠同胞交配产生F2代小鼠，经过筛选鉴定得到纯合子的转基因小鼠。本发明方法使GPR120表达细胞同时表达eGFP，从而在激光激发下辨别出GPR120阳性细胞。

主权项

eGFP标记GPR120阳性细胞的小鼠模型构建方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤1，设计针对目的位点基因组的guideRNA靶序列，并根据序列将其进行体外转录获得针对该基因的guideRNA；步骤2，构建用于目的片段重组的donor DNA重组质粒；步骤3，将体外转录的guideRNA及构建的donor DNA重组质粒进行受精卵注射，获得F0代小鼠，通过长片段PCR的方式，对F0代小鼠的基因型进行鉴定，PCR结果经测序确认，获得正确同源重组的阳性F0代小鼠；步骤4，将F0代小鼠与野生型小鼠交配获得F1代小鼠，通过长片段PCR的方式，对F1代小鼠的基因型进行鉴定，PCR结果经测序确认，获得正确同源重组的阳性F1代小鼠；步骤5，F1中阳性转基因小鼠同胞交配产生F2代小鼠，经过筛选鉴定之后，得到纯合子的转基因小鼠，并用纯合子来保存育种。