一种利用重组钝齿棒杆菌高效合成L‑茶氨酸的方法

摘要

一种利用重组钝齿棒杆菌高效合成L‑茶氨酸的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明首先验证了枯草芽孢杆菌来源的GGT信号肽可以实现GGT在C.glutamicum体系中分泌表达。同时重组菌C.glutamicum SDNN403/pXMJ19‑tacM‑ggt的胞外酶活约为C.glutamicum SDNN403/pXMJ19‑ggt的2倍，这说明tacM启动子更有利于GGT酶活的合成。采用底物流加策略高产L‑茶氨酸，转化体系包含：终浓度为0.8U/mL的GGT，pH 10，37℃，从0h开始每隔两个小时补加22mmol/L的L‑谷氨酰胺，66mmol/L的乙胺。批次流加在12h时达到最大茶氨酸产量118mmol，转化率为92.8％。本文首次实现B.subtilis来源的γ‑谷氨酰转肽酶基因(ggt)在C.glutamicum SDNN403中分泌表达，通过分批流加底物获得目前报道的利用重组C.glutamicum合成L‑茶氨酸的最高产量。

主权项

一种高效分泌合成γ‑谷氨酰转肽酶的重组钝齿棒杆菌，其特征是：将SEQ ID NO:1所示ggt基因克隆至pXMJ19‑tacM载体上并转化至钝齿棒杆菌中获得。