生产反式‑4‑羟脯氨酸的工程菌及其应用

摘要

本发明涉及一种生产反式‑4‑羟脯氨酸的工程菌及其应用，所述工程菌通过将优化的脯氨酸4‑羟化酶基因与色氨酸串联启动子经全基因合成后连接到插入有透明颤菌血红蛋白基因的表达载体，再将所述表达载体导入大肠杆菌后获得；所述优化的脯氨酸4‑羟化酶基因包括：将脯氨酸4‑羟化酶基因中低使用率密码子替换为大肠杆菌中高使用率密码子，并调整脯氨酸4‑羟化酶基因的CG％使其接近宿主菌的CG％；消除了脯氨酸4‑羟化酶基因的酶切位点；调整脯氨酸4‑羟化酶基因的二级结构以避免脯氨酸4‑羟化酶基因的mRNA的5’端形成二级结构。本发明的工程菌可大量、高效地生产反式‑4‑羟脯氨酸。

主权项

一种生产反式‑4‑羟脯氨酸的工程菌，其特征在于，所述工程菌通过将优化的脯氨酸4‑羟化酶基因与色氨酸串联启动子经全基因合成后连接到插入有透明颤菌血红蛋白基因的表达载体，再将所述表达载体导入大肠杆菌后获得；所述优化的脯氨酸4‑羟化酶基因包括：将脯氨酸4‑羟化酶基因中低使用率密码子替换为大肠杆菌中高使用率密码子，并调整脯氨酸4‑羟化酶基因的CG％使其接近宿主菌的CG％；消除了脯氨酸4‑羟化酶基因的酶切位点；调整脯氨酸4‑羟化酶基因的二级结构以避免脯氨酸4‑羟化酶基因的mRNA的5’端形成二级结构。