一种苏丹草体外诱导管胞的方法

摘要

本发明涉及一种苏丹草体外诱导管胞分化的方法，属于植物细胞工程技术领域。以苏丹草种子组织培养诱导的淡黄色颗粒状愈伤组织为外植体，在不含植物生长激素的基本培养基中，添加1.0～9.0g/L活性炭，在黑暗、每日16h和24h的散射光下培养5～21d，培养室温度26～28℃，体外诱导获得了管胞。本发明建立的苏丹草体外诱导管胞分化的方法，管胞分化率最高达到47.23％，本发明的优点是：操作简便，诱导效率高，为苏丹草次生细胞壁木质素调控机制研究和定向改良提供了技术支撑。

主权项

一种苏丹草体外诱导管胞分化的方法，其特征在于：包含以下步骤：a.种子的消毒；b.愈伤组织的诱导：将经消毒处理的种子接种于愈伤组织诱导培养基中，放入培养室暗培养，培养室温度为26~28℃，35~40d后获得淡黄色、颗粒状愈伤组织；c.愈伤组织的继代培养：从愈伤组织诱导培养基上选用淡黄色、颗粒状胚性愈伤组织，接种到继代培养基中暗培养21~28d，培养室温度26~28℃；d.愈伤组织的管胞诱导：取生长旺盛的淡黄色较松散的颗粒状胚性愈伤组织，接种到愈伤组织管胞诱导培养基中，光照16 h/d或24h/d，培养12~21d，培养室温度26~28℃；其中，所述的愈伤组织诱导培养基为：基本培养基附加2,4‑D 3 mg/L、KT 0.2 mg/L和水解酪蛋白酶１g/L；所述的基本培养基为：MS大量元素+MS微量元素+B5有机成分+蔗糖30g/L+琼脂条8g/L；所述的愈伤组织继代培养基为：基本培养基附加2,4‑D 2 mg/L和0.05 mg/L 6‑BA；所述的管胞诱导培养基为：基本培养基附加3.0g/L活性炭；培养基在高压灭菌前用氢氧化钠和盐酸调整pH值至5.8~5.9。