| 主权项 |
饮品中ε‑聚赖氨酸含量和分子量的检测方法,其特征在于,所述的检测方法, 具体步骤如下：a).饮品中ε‑聚赖氨酸的提取：取待测样品10 mL，将待测样品70℃加热10 min，10 000 r/min离心10 min，然后收集上清液;b).将1 g D152大孔弱酸性阳离子交换树脂加入到收集的上清液中，之后将饮品上清液和D152大孔弱酸性阳离子交换树脂的混合液以200 r/min的转速搅拌混合5 min，使得ε‑聚赖氨酸充分吸附在D152大孔弱酸性阳离子交换树脂上;c).使用1 mol/L的盐酸10 mL将ε‑聚赖氨酸从D152大孔弱酸性阳离子交换树脂上洗脱下来，洗脱液作为高效液相色谱检测的对象;d).高效液相色谱流动相配制：配制含0.01%硫酸的超纯水溶液;e).检测条件：检测过程中使用色谱柱为水相凝胶过滤色谱柱，流速为0.5 mL/min，柱温为30℃，样品进样量为20 μL，检测时长为30 min，紫外检测波长为215 nm;f).将从饮品中提取获得的ε‑聚赖氨酸样品进样至高效液相色谱中;通过ε‑聚赖氨酸在215 nm下的紫外吸收强度，计算获得样品中ε‑聚赖氨酸的含量；通过样品在凝胶色谱柱中的保留时间，计算获得样品中ε‑聚赖氨酸的分子量;g).ε‑聚赖氨酸分子量和其在凝胶过滤色谱柱中保留时间关系的标准曲线绘制：配制分子量为8、4、2、1 kDa的聚乙二醇标准溶液，分别通过高效液相色谱和示差折光检测器检测其在凝胶过滤色谱柱中的保留时间,之后制作样品分子量和保留时间对应的标准曲线,其对应方程为Y=‑0.908X+22.499，R<sup>2</sup>=0.9913，其中Y为ln（ε‑聚赖氨酸分子量），X为ε‑聚赖氨酸在高效液相色谱中的保留时间;h).ε‑聚赖氨酸含量和紫外波长215 nm处吸收强度对应的标准曲线绘制：配制浓度为10、5、2.5、1、0.5、0.25 mg/L的ε‑聚赖氨酸标准溶液，分别通过上述高效液相色谱方法检测其在215 nm下的紫外吸收值;之后制作ε‑聚赖氨酸浓度和在215 nm紫外吸收值相对应的标准曲线,其对应方程为Y=1.31×10<sup>‑3</sup> X + 7.02×10<sup>‑2</sup>, R<sup>2</sup>=0.9945，Y为ε‑聚赖氨酸浓度，X为样品在215 nm下的吸收值。 |
