一种从白酒发酵酒醅中提取总RNA的方法

摘要

本发明公开了一种从白酒发酵酒醅中提取总RNA的方法，属于生物技术领域。本发明针对白酒酒醅样品的特殊性，通过联合月桂酸钠(Sodium Laurate，SL)抽提法以及异硫氰酸胍‑酚‑氯仿抽提法(Trizol)，能在2小时内快速提取群落微生物的总RNA。利用本发明的方法提取的微生物总RNA产量高、完整性好、纯度较好，能有效提取样品中的真核和原核微生物。

主权项

一种从白酒发酵酒醅中提取总RNA的方法，其特征在于，所述方法的步骤如下：(1)将酒醅样品用无菌PBS缓冲液悬浮并加入玻璃珠漩涡震荡；(2)低速离心后取上清，沉淀用PBS缓冲液重复洗涤、低速离心，合并上清；(3)将步骤(2)得到的上清高速离心，取沉淀，冷冻；(4)将由15‑25份月桂酸钠抽提缓冲液、15‑25份Trizol、0.5‑1.5份巯基乙醇和0.5‑1.5份二硫苏糖醇组成的抽提混合液，轻轻混匀，放置冰上；(5)将步骤(3)的冷冻的样品置于预冷的研钵中，倒入液氮，迅速研磨至粉末，期间不断加入液氮，防止研磨过程中RNA被降解；(6)将研磨好的粉末移入装有抽提混合液的Rnase‑free离心管中，反复缓慢的摇匀；(7)高速离心，吸取上清液置于Rnase‑free离心管中；(8)加入0.8‑1.2倍体积的氯仿，盖好管盖，轻轻混匀，放置冰上；(9)高速离心，吸取上清液置于Rnase‑free离心管中；(10)加入0.5‑1倍体积的异丙醇，混匀，冰上放置；(11)高速离心，弃去上清液；(12)加入体积浓度为70‑80％的乙醇洗涤沉淀，高速离心后弃去上清液；(13)加入RNase‑Free ddH₂O，即得到溶解的RNA。