一种混菌液态发酵黄酒加工废弃物生产单细胞蛋白的方法

摘要

本发明属于环境资源利用领域，具体涉及一种混菌液态发酵黄酒加工废弃物生产单细胞蛋白的方法。分别将产朊假丝酵母和白地霉进行活化、扩增培养，得到两种液体菌种；将黄酒糟和米浆水灭菌后，加入一定量的氮源，充分混合、灭菌后作为液态发酵培养基；将两种液体菌种按一定比例接入液态发酵培养基并充分混匀，接入空气曝气泵，以1 vvm曝气率，自然pH，30℃条件下发酵4~6天，固液分离后取固体进行真空冷冻干燥，即可得到发酵单细胞蛋白产品。该发酵产品中粗蛋白含量高，可达66%，营养成分全面，粗蛋白、氨基酸和粗脂肪等成分均高于国家标准对饲料成分的要求，并且制备方法可实现连续化生产，经济可行，具有广阔的市场前景和应用价值。

主权项

一种混菌液态发酵黄酒加工废弃物生产单细胞蛋白的方法，其特征在于，以黄酒加工过程中产生的黄酒糟和米浆水为原料，采用产朊假丝酵母和白地霉对黄酒糟米浆水混合物进行混菌液态发酵，包括以下步骤：（１）菌种培养：a. 菌株活化将产朊假丝酵母和白地霉菌株分别放置于安瓿瓶内，在超净台下用酒精灯下加热顶端灭菌，用镊子敲下，用1 mL无菌针筒吸取0.4 mL YPD液体培养基，加入安瓿瓶中，摇晃至产朊假丝酵母和白地霉菌株悬浮，移至50 mL比色管中，加入30 mL 经121℃高压灭菌20 min后的YPD液体培养基（蛋白胨5 g，酵母提取物2.5 g，葡萄糖5 g，溶解定容至500 mL）中，盖上纱布和锡纸，放置28℃生化培养箱中培养3天后加入5 mL丙三醇，保存于‑24℃冷藏室；b. 菌株种子液制备微波炉高火4 min解冻YPD固体培养基（YPD培养基25 g，溶解定容至500 mL），倒置灭菌的培养皿，等待冷却后，将无菌接种环蘸取一环活化菌液，在培养皿中三段划线，28℃培养3天；分别从扩大培养后的固体培养基中挑取少量菌种于液体培养基中，28℃生化培养箱，180 rpm振荡培养10 h后，每隔2 h取少量菌液4层无菌纱布过滤，除去菌丝，用血球计数板对滤液孢子数计数，当每毫升孢子数数量级达10⁷时，菌液可以作为液体种子液使用；（2）制备液态发酵培养基将黄酒糟和米浆水按6~25%质量百分浓度配比后，充分混合均匀，并加入氮源，在121℃下高压灭菌20 min，冷却后得到黄酒糟米浆水液态发酵培养基；（3）混菌液态发酵制备单细胞蛋白将步骤（１）所得的达到10⁷数量级的产朊假丝酵母和白地霉种子液按1:0、0:1、1:1、1:2、2:1、1:3、和3:1（菌液体积比）的接种至经121℃高压灭菌20 min后的300 mL酒糟米浆水液态发酵培养基中，产朊假丝酵母和白地霉种子液的接种总量为液体发酵培养基重量的5%‑50%，接种完毕后充分混匀，接入空气曝气泵，以0.5~2 vvm曝气率，自然pH，30℃条件下发酵4~6天，固液分离后取固体进行真空冷冻干燥，即可得到发酵单细胞蛋白。