一种利用黄岑根转化合成熊果苷的方法

摘要

本发明公开了一种利用黄岑根转化合成熊果苷的方法，属于熊果苷合成技术领域。本发明通过自制组织培养液培养黄岑根，加入氯化钙和失水山梨醇脂肪酸酯增加黄岑根的细胞通透性，增加对苯二酚通过率，促进黄岑根对熊果苷的合成，再乙醇提取结晶，干燥制得熊果苷。本发明生产周期短，分离纯化容易，选择性好，充分利用培养液中添加氯化钙和表面活性剂提高组织细胞通透率，增加熊果酸的产量，针对性强，所得产物生物利用度高达99.6%以上，产量提高了30.2～32.5%。

主权项

一种利用黄岑根转化合成熊果苷的方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）按重量份数计，称取90～95份硝酸钾、8～9份磷酸二氢钾、1～2份乙二胺四乙酸二钠、0.1～0.3份硼酸、0.1～0.2份甘氨酸、0.3～0.5份硫酸锌、10～20份肌醇、40～50份水解乳蛋白、10～15份葡萄糖、50～55份蔗糖及800～900份蒸馏水，搅拌混合均匀，得自制黄岑根组织培养液；（2）量取400～500mL上述自制黄岑组织培养液装入锥形瓶中，再移入无菌箱中，向锥形瓶中接种4～5g鲜嫩的黄岑毛状根，用黑布遮住无菌箱在黑暗环境中于27～29℃下培养18～22天；（3）培养结束后分别向锥形瓶中加入10～20mL质量浓度为5%氯化钙溶液和3～5mL失水山梨醇脂肪酸酯，放置在摇床上振荡混合过夜，再向其中加入1～2mL质量浓度为10%对苯二酚溶液，继续保温转化30～35h；（4）取出转化后黄岑毛状根，并用去离子水冲洗20～30min后，放入气流粉碎机中粉碎，过60目标准筛，得黄岑根碎块，将黄岑根碎块移入超声提取仪中，同时向其中加入黄岑根碎块总体积3～5倍质量浓度为60%乙醇溶液，以300～400W功率超声振荡提取3～5h后，过0.4～0.5μm微孔滤膜，得纯化提取液；（5）将上述纯化提取液装入旋转蒸发器中，旋蒸浓缩至其原体积的1/5后，向其加入0.1～0.3g熊果苷晶种，搅拌均匀后放入4～6℃冰水浴中静置结晶过夜，过滤得析出的熊果苷晶体，将其放入真空干燥机中，在0.05～0.07MPa的真空度和60～70℃条件下干燥1～2h，即得熊果苷。