一种基于两核苷酸合成测序的PCR产物SNP分型/突变检测方法

摘要

本发明提供了一种基于两核苷酸合成测序的PCR产物SNP分型/突变检测方法。通过循环将两核苷酸同时加入到测序反应中，每个测序反应得到的不是具体的碱基序列，而是加入的两核苷酸种类的编码及其核苷酸合成的编码数目组成的信息，根据每个分析位点的野生型、突变型、杂合型均对应唯一、独特的两类编码及其编码数目的测序信息判断出待测PCR产物的SNP分型/突变类型。利用该测序方法阅读长度的特点，可以实现只需一条测序引物即可获得多个位点的分析，避免了利用多重测序引物进行多个分析。该方法有效减少了SNP分型/突变检测的成本、降低测序所需模板量、提高检测灵敏度、缩短操作时间。

主权项

一种基于两核苷酸合成测序的PCR产物SNP分型/突变检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提取样本的基因组DNA；(2)PCR扩增获得目的片段；(3)利用两核苷酸对目的片段进行两核苷酸同时合成测序反应，所述的两核苷酸为dATPαS、dCTP、dTTP、dGTP中选择的两种不同的核苷酸，每个测序反应得到的测序信息包括加入的两核苷酸的种类信息、以及核苷酸合成的数目信息；(4)由测序图谱得到的SNP位点处的峰型确定SNP分型/突变类型。