一种白芨组培快繁方法及运用

摘要

本发明公开了一种白芨组培快繁方法，具体包括以下步骤：外植体灭菌方法、白芨种子无菌萌发、种胚形态及种胚突破种皮过程观察、白芨的组培快繁和用TTC法测定白芨种子活力。本发明方法获得的白芨苗方法简单，而且大大降低了育苗成本。本培养方法出芽快，增殖率高，方法简单，不需要增加组培设备，生产成本低，可批量生产，应用价值高。

主权项

一种白芨组培快繁方法，其特征在于，具体包括以下步骤：S1、外植体灭菌方法：首先用流水冲洗蒴果26‑32min，用洗衣粉水刷洗蒴果表面，用蒸馏水冲洗2‑3遍，在超净工作台上先用75％酒精消毒2‑3min，再用10％次氯酸钠溶液浸泡8‑12min，期间不停的摇动，使其消毒彻底，无菌水冲洗4‑6遍，无菌滤纸吸干表面水分待用；S2、在无菌条件下剖开蒴果，用镊子夹取蒴果外壳，将种子轻轻抖落到培养基表面；S3、白芨种子无菌萌发：基本培养基采用MS特殊说明外，均添加蔗糖30L和琼脂粉6.5g/L；培养基按试验设计在灭菌前添加不同的生长调节剂或有机物；S4、培养基高温灭菌前调pH至5.4，121℃下灭菌12‑20min，每处理4次重复；白芨萌发培养基：(1)MS；(2)MS+NAA 1.0mg/L；原球茎、叶片诱导培养基见表1；白芨生根培养基MS+NAA 1.0mg/L；置于光强2000‑2500lx，光周期16h/8h，温度23‑27℃的条件下培养；S5、种胚形态及种胚突破种皮过程观察：接种剩余种子在NIKON ECLIPSE 55i光学显微镜10倍物镜下观察种子胚形态和发育状况，每个蒴果观察20个视野并统计数据，以有胚率表示，结果取平均值，有胚率＝(有胚的种子数/总种子数)×100％；S6、白芨的组培快繁：将种子无菌萌发诱导的原球茎及叶片切割后，原球茎纵切，叶片切割长度在0.35‑0.6，分别接种到诱导培养基上，观察其诱导分化结果；S7、用TTC法测定白芨种子活力：活种子的胚在呼吸作用过程中进行氧化还原反应，而死种子则无此反应；当TTC渗入活种子胚细胞内作为氢受体而被脱氢辅酶(NADH2或NADPH2)上的氢还原时，无色的TTC转变为红色的三苯基甲腙(TTF)；如果种胚死亡或种胚生活力衰退，则不能染色或染色较浅。