一种尿液外泌体ELISA的检测方法及其应用

摘要

本发明提供一种外泌体检测的ELISA方法，具体步骤包括：样本收集、包被孵育、封闭、加样、终止反应、判定结果、构建标准曲线，进行临床样本测试。本发明还提供一种检测尿液外泌体的ELISA检测方法在膀胱癌疾病的评估和防治方面的应用。本方法具有高度特异性的特点，本发明的检测方法也不需要昂贵且精密的实验仪器，具有很大的应用前景。

主权项

一种检测尿液外泌体的ELISA检测方法，其特征在于，包括如下具体步骤：（1）样本收集：收集健康志愿者/膀胱癌患者尿液样本室温离心后，上清液离心收集外泌体沉淀并用PBS （pH 7.0）重悬外泌体，形成外泌体重悬液，保存备用；（2）包被孵育：按每孔100 μL将外泌体重悬液包被到酶标板孔，孵育一定时间后，移除上清液；（3）封闭：按每孔100 μL加入封闭液，一定时间后移除孔内液体，按每孔200μL添加PBS洗涤缓冲液（pH 7.4），静置后移除孔内液体，重复洗涤数次后拍干；每次检测同时设定空白对照、阴性对照和阳性对照，每个样本重复封闭2‑3次；（4）加样：对封闭后的样本进行依次进行添加抗体和添加酶标反应物，之后加底物显色；（5）终止反应：按每孔50 μL加入终止反应液，在酶标仪内测OD₄₅₀值，并记录结果；（6）判定结果：试验组OD₄₅₀/阴性对照组OD₄₅₀值大于或等于2.1为阳性；（7）构建标准曲线，根据判定结果和标准曲线的对比进行检测。