一种获得稳定的烟粉虱MED隐种BtTRP基因突变系的方法

摘要

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种获得稳定的烟粉虱MED隐种BtTRP基因突变系的方法。所述方法包括以下步骤：BtTRP基因突变品系的获得、获得亲本F0代、获得杂交F1代、自交F2代；高温胁迫检测，及低温胁迫检测，获得稳定的烟粉虱MED隐种BtTRP基因突变系。

主权项

一种获得CRISPR/Cas9系统诱导的烟粉虱MED隐种BtTRP基因突变系的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)BtTRP基因突变品系的获得，包括以下步骤：(1‑1)BtTRP基因sgRNA引物的设计：基于烟粉虱MED隐种的BtTRP基因序列，设计sgRNA的靶标位点，引物序列如下：MED‑F：GAAATTAATACGACTCACTATAGGACCAGGAGAGAGGCAAACTCGTTTTAGAGCTAGAAATAGC；sgRNA‑R：AAAAGCACCGACTCGGTGCCACTTTTTCAAGTTGATAACGGACTAGCCTTATTTTAACTTGCTATTTCTAGCTCTAAAAC，(1‑2)合成BtTRP基因sgRNA，(1‑3)合成Cas9mRNA，(1‑4)显微注射，将步骤(1‑2)获得的BtTRP基因sgRNA和步骤(1‑3)获得的Cas9mRNA混合，摩尔比为2:1，注射至烟粉虱MED隐种红眼期伪蛹，培育获得BtTRP基因突变品系；(2)获得亲本F0代；(3)获得杂交F1代；(4)获得自交F2代；(5)高温胁迫检测，及低温胁迫检测，获得稳定的烟粉虱MED隐种BtTRP基因突变系。