一种通用型慢病毒载体及其制备方法

摘要

一种通用型慢病毒载体及其制备方法，涉及一种慢病毒载体及其其制备方法。本发明是要解决目前CAR‑T制备中过程中载体构建步骤烦琐、耗时过长，慢病毒载体无法通用，成本高的问题。该慢病毒载体以pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑Puro质粒为骨架，向质粒骨架的多克隆位点MCS处插入以下元件：CD8α Leader DNA序列、CD8α铰链区、CD28跨膜区‑胞内区、CD137胞内区和CD3ζ。方法：一、引物设计；二、外周血单个核细胞的获得、激活；三、mRNA的提取及RT反应；四、重组质粒制备；五、合成单链CD8α Leader DNA序列；六、将线性载体、目的基因片段及CD8α Leader片段连接，即得到通用型慢病毒载体。本发明用于制备慢病毒载体。

主权项

一种通用型慢病毒载体，其特征在于该慢病毒载体以pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑Puro质粒为骨架，向质粒骨架的多克隆位点MCS处插入以下元件：CD8αLeader DNA序列、CD8α铰链区、CD28跨膜区‑胞内区、CD137胞内区和CD3ζ；其中CD8αLeader DNA序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，CD8α铰链区如序列表中SEQ ID NO：2所示，CD28跨膜区‑胞内区如序列表中SEQ ID NO：3所示，CD137胞内区如序列表中SEQ ID NO：4所示，CD3ζ如序列表中SEQ ID NO：5所示。