一种规模化分离纯化重组人源胶原蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种规模化分离纯化重组人源胶原蛋白的方法，通过将线性重组蛋白进行初折叠和重折叠，精确控制蛋白分子的空间半径，既有利于微滤和超滤膜孔径的精确选型，又可提高蛋白的回收率，联合应用微滤和超滤，分别去除大分子和小分子杂质，同时超滤实现蛋白浓缩，减轻了后期凝胶柱层析分离的负荷，再通过加入尿素，实现重组蛋白折叠后的解旋，避免了有害物的残留。本发明方法获得的重组人源胶原蛋白，纯度可达99％，回收率高于65％，方法操作简便，显著降低了重组人源胶原蛋白的规模化生产的成本，特别适合工业化生产。

主权项

一种规模化分离纯化重组人源胶原蛋白的方法，其特征在于，具体步骤如下：将巴斯德毕赤酵母菌Pichia pastoris发酵液离心，收集上清液，上清液先在pH≥9的第一缓冲溶液中进行初折叠，再在通入足量空气的、9＜pH≤11的第二缓冲溶液中进行充分的重折叠，折叠后通入氮气稳定蛋白，之后微滤去除蛋白溶液中的大分子杂质，超滤去除小分子杂质，同时进行蛋白质的浓缩，在浓缩液中加入1～10M的尿素使重折叠蛋白解旋，解旋液经凝胶柱层析纯化，冷冻干燥后得到重组人源胶原蛋白。