一种快速检测植物水提物抗炎活性的方法

摘要

本发明公开了一种检测植物水提物体外抗炎活性的方法，该方法将现有技术中常忽略的水提物背景作为一个重要的检测因素，克服了目前活体动物实验和细胞实验存在的周期较长、操作繁琐、花费较高、干扰因素较多以及细胞实验不能直接独立表征抗炎活性等缺陷，具有简单、直接、快速、结果稳定、花费较低等优点，尤其适用于多种水提物的初筛工作，整个检测过程可在1小时内完成。基于本发明的检测方法，可进一步实现对植物水提物中的抗炎活性成分做到精准定量。

主权项

一种检测植物水提物体外抗炎活性的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)植物提取液的制备：将植物原料经研磨粉碎后过40目筛，按料水的质量体积比1：20放入密闭容器，在80℃、静置条件下提取6h后，中性滤纸过滤后收集滤液，60℃浓缩至0.5mg/ul生药浓度，获得植物提取液。(2)制备以下反应液：a：取1ul步骤(1)所得的植物提取液加入含有30ul 5‑LOX稀释液的1.5ml dorf管中，30℃孵育30min后，加入200ul底物，30℃反应3min，加入500ul终止液终止反应，加入500ul蒸馏水，得到反应液a；b：取1ul蒸馏水加入含有30ul 5‑LOX稀释液的1.5ml dorf管中，30℃孵育30min后，加入200ul底物，30℃反应3min，加入500ul终止液终止反应，加入500ul蒸馏水，得到反应液b；c：取1ul步骤(1)所得的植物提取液加入含有30ul蒸馏水的1.5ml dorf管中，30℃孵育30min后，加入200ul底物，30℃反应3min，加入500ul终止液终止反应，加入500ul蒸馏水，得到反应液c；d：取1ul蒸馏水加入含有30ul 5‑LOX稀释液的1.5ml dorf管中，30℃孵育30min后，加入500ul终止液终止反应，然后加入200ul底物，30℃反应3min，加入500ul蒸馏水，得到反应液d；所述5‑LOX稀释液由1体积的5‑LOX与50体积的蒸馏水组成，所述底物为含亚油酸0.54mL/L的硼酸缓冲液，所述终止液为无水乙醇；(3)将步骤(2)制备的各反应液分别放置离心机中以3000rpm速度离心5min，获得上清液；(4)将步骤(3)中制备的各个上清液以每孔200ul的体积加入至96孔酶标板中，在酶标仪上选取234nm波长检测反应液的吸光度OD值。(5)如步骤(4)中的OD值超过酶标仪检测范围，将植物提取液的浓度稀释10倍(体积比)后，再按照上述步骤(1)、(2)、(3)和(4)依次操作。(6)植物水提物的抗炎活性以抑制率表示，抑制率计算公式如下：抑制率越高，植物水提物体外抗炎活性越强。当抑制率为负值时，可视为无抗炎活性。