一种利用低温乙醇法去除人血白蛋白热原质的方法

摘要

本发明公开了一种利用低温乙醇法去除人血白蛋白热原质的方法。热原系指能引起恒温动物体温异常升高的致热物质，注入人体的注射剂中含有热原量达1μg/kg就可引起不良反应，危及生命。本发明在原有制备人血白蛋白的之前，加入步骤：将热原超标的人血白蛋白制品，用0℃生理盐水稀释至30g/L，按每100Kg白蛋白加入FIV沉淀20～50Kg，搅拌溶解，完毕后用pH4.0醋酸缓冲液调整溶液pH值至5.80±0.05；开启冷媒系统降温溶液至0℃±0.05℃，加入温度低于-15℃的95%（V/V）乙醇至乙醇最终浓度为40%（V/V）,加乙醇速度≤70L/h，控制溶液pH值为6.40～6.50，边加乙醇边降温，使溶液最终温度控制在-5.0℃±0.5℃。通过此步骤可以有效去除注射液中的热原。

主权项

一种利用低温乙醇法去除人血白蛋白热原质的方法，主要包括如下步骤：（1）向人血白蛋白制品中加入硅藻土，加入量为每1000L溶液2～4Kg硅藻土，搅拌30min后用压滤机压滤，压滤的过程中，工作压力控制在0.2MPa之内，滤液温度控制在‑4.5℃±1.0℃，每30min检查一次滤液的温度和澄明度，压滤结束后用冷压缩空气吹尽压滤机腔内液体，到出气泡后停；泵入‑5.0℃±0.5℃ FIV平衡液冲洗压滤机，每台冲洗150~200L，最后用冷压缩空气吹尽压滤机腔内制品，收集滤液，即组分Ⅳ压滤液，沉淀弃；硅藻土使用前经180℃干烤2.5h，降温至0℃以下备用；FIV平衡液的配制方法为：配制量为每台压滤机400L；配制方法：含40%（V/V）的乙醇，3.5～4.5g/L的氯化钠，2.5～3.5g/L的无水乙酸钠，用冰乙酸调整pH值至6.4～6.5，溶液温度温度‑5.0℃±0.5℃；压滤机在使用前先安装滤板，每100Kg白蛋白装25张滤板，安装滤板后，用注射用水冲洗压滤机至细菌内毒素为阴性；以每台压滤机5Kg的量向FIV平衡液中加入硅藻土，搅拌后将其泵入压滤机进行循环冷却，压滤机出口温度到‑3℃以下时，停止循环，洁净预冷的压缩空气将压滤机吹干备用；（2）组分Ⅴ沉淀的制备①计量组分Ⅳ压滤液体积，开启搅拌，降温，制品降温到‑6～‑7℃，缓慢加入2mol/L HAC，加入速度为50ml/min，调整溶液pH至5.2～5.5，调整完pH后将制品降温至‑8～‑9℃，搅拌2h，静放6～8h；②开启搅拌，向制品中加入硅藻土，加入量为每1000L溶液2～4Kg硅藻土，搅拌30min后开始压滤；过滤液弃或收集后进行乙醇回收处理；压滤完毕后，松开压滤机，刮取组分Ⅴ沉淀；硅藻土使用前经180℃干烤2.5h，降温至0℃以下备用；FV平衡液的配制方法是，配制量为每台压滤机400L；配制方法：注射用水230L，加95％乙醇170L，降温到‑8～‑9℃；压滤机在使用前先安装滤板，每100Kg白蛋白装25张滤板，安装滤板后，用注射用水冲洗压滤机至细菌内毒素为阴性；以每台压滤机5Kg的量向FV平衡液中加入硅藻土，搅拌后将其泵入压滤机进行循环冷却，压滤机出口温度到‑5℃以下时，停止循环，洁净预冷的压缩空气将压滤机吹干备用；（3） 组分V精制纯化① 组分V沉淀用5倍体积的8%乙醇溶液搅拌溶解，沉淀完全溶解后，调pH值至4.50～4.70，制品最终温度控制为‑3.0℃±0.5℃，继续搅拌2~3h压滤；② 压滤：压滤过程中搅拌不停，压滤完后，用低温冷空气吹出滤器内液体，至出气泡后停止，后用FV精制平衡液冲洗滤板，冲洗液并入到过滤液中,进行超滤步骤；FV精制平衡液的配制方法是，配制量：每台压滤机250L；配制方法为：含乙醇12%，溶液pH值4.50~4. 70，降温至‑3.0℃±0.5℃；压滤机在使用前先安装滤板，每100Kg组分V沉淀安装滤板15～20张，安装滤板后用注射用水冲洗至细菌内毒素为阴性；使用前用FV精制平衡液循环压滤机，使压滤机出口温度应达到‑2℃以下,备用；（4）超滤① 开启搅拌，用1M碳酸氢钠调整滤液pH值至7.0～7.2；② 将纯化液首次浓缩至蛋白浓度100～150g/L，先用5倍的9g/L的氯化钠溶液等体积透析，再用3倍的注射用水等体积透析；透析结束后，将制品最终浓缩至蛋白质含量210g/L以上；用适量注射用水洗涤超滤膜，收集洗膜液，并入上述蛋白液中即为人血白蛋白原液，取样做进行原液检测；（5）半成品配制根据原液检定进行稀释配制：根据原液蛋白质含量进行配制，按每克蛋白质160mmol称取辛酸钠，按每克蛋白质120～130mmol称取氯化钠，称取后以少量注射用水溶解，加入制品，再将制品稀释至蛋白质浓度195～200g/L，调整pH值在6.8～7.0；（6）巴氏灭活：将制品进行60℃10h灭活病毒，灭活后除菌分装；其特征在于：在步骤（1）之前还包括下述步骤：将热原超标的人血白蛋白制品，用0℃生理盐水稀释至30g/L，按每100Kg白蛋白加入FIV沉淀20～50Kg，搅拌溶解，完毕后用pH4.0醋酸缓冲液调整溶液pH值至5.80±0.05；开启冷媒系统降温溶液至0℃±0.05℃，加入温度低于‑15℃的95%乙醇至乙醇最终浓度为40%, 加乙醇速度≤70L/h，控制溶液pH值为6.40～6.50，边加乙醇边降温，使溶液最终温度控制在‑5.0℃±0.5℃。