一种生物转化制备天然可可香料的方法及其应用

摘要

本发明提供一种生物转化制备天然可可香料的方法及其应用，其采用食甲醇芽孢杆菌VJ4‑1(保藏号为CCTCC NO:M 2012004)生物转化天然可可香料，制备的天然可可香料香气质提高，香气丰富，大分子刺激性成分减少，且工艺方法具有天然环保无害优点，应用到再造烟叶中，使烟气质提升，增加可可气息与烘烤香气、豆香奶香底蕴，降低烟气刺激，减少杂气，丰富烟香，改善了再造烟叶刺激大、口感不适的吸味缺陷，能与其它烟用香精香料混合调配使用。

主权项

一种生物转化制备天然可可香料的方法，其特征在于包括以下步骤：1)将可可粉与水按质量比1∶20～50混合，回流提取3～5h后过滤，重复1～3次回流提取，合并滤液，即得可可底液，并灭菌；2)菌种活化：将食甲醇芽孢杆菌VJ4‑1接种到葡萄糖麦芽糖琼脂斜面培养基上，在25～38℃，静置培养24～72h后得到活化菌种，置于4℃冰箱中，所述食甲醇芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)VJ4‑1保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2012004，保藏日期：2012年1月11日；3)制备种子培养液：将步骤2)中所得的斜面培养物，接种到种子培养基，在25～35℃、pH 5‑8条件下，100～150rpm/min振荡培养24h～72h，连续转接1～3次，制得种子培养液；4)生物转化：将种子培养液按体积比10～20％接种到到上述步骤1)中的灭菌的可可底液，接种后的可可底液的装罐量为30～40％，pH5～8，温度32～38℃，转速100～150rpm，不避光条件下生物转化1～5天，得到可生物转化可可液；5)将生物转化可可液抽滤浓缩，与95％乙醇按质量比1∶3～5，沉淀过夜，4000～8000rpm离心10～20min，取滤液后减压浓缩至密度为1.1～1.3的浸膏，即得生物转化天然可可香料。