一种无基因敲除提高大肠杆菌中乙醇酸产率的方法

摘要

本发明公开了一种无基因敲除提高大肠杆菌中乙醇酸产率的方法，其特征在于：包括，构建重组质粒，获得重组大肠杆菌，配制培养基，制备种子液，发酵。与前期已报道的生物法合成乙醇酸相比，本发明中所提到的乙醇酸发酵技术方案在没有敲除大肠杆菌BL21(DE3)中任何基因的情况下提高了乙醇酸的产量及产率。以葡萄糖为唯一碳源，GL1、GL3、GL2摇瓶发酵产率分别为0.109g/g，0.155g/g，0.248g/g，通过发酵条件优化，GL2上罐发酵时产量达到4.275g/L，产率为0.427g/g。

主权项

一种无基因敲除提高大肠杆菌中乙醇酸产率的方法，其特征在于：包括，提取大肠杆菌DH5α基因组，并以此为模板进行PCR扩增目的基因，在35～37℃条件下，NdeI和XhoI双酶切PCR扩增目的基因1.5～2.5h；PCR产物纯化，在35～37℃条件下，NdeI和XhoI双酶切质粒pCOLDuet‑11.5～2.5h，回收载体片段，用T4连接酶处理目的基因片段与载体片段，在35～37℃培养箱内培养，验证后完成重组质粒的构建，并进行重组大肠杆菌的制备；将菌种接种培养，在35～37℃、220～280r/min条件下培育，将培育后的种子液离心，并重悬菌体，进行发酵，得到含有乙醇酸的发酵液。