一种具有抗肿瘤活性的竹荪多糖-锌螯合物的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的竹荪多糖‑锌螯合物的制备方法，该方法包括以下步骤：（1）竹荪多糖的提取；（2）竹荪多糖的分离；（3）竹荪多糖的纯化；（4）在竹荪多糖溶液中加入无机锌源进行螯合反应；（5）醇沉（6）冷冻干燥，得竹荪多糖‑锌螯合物。本发明所研制的竹荪多糖‑锌螯合物，有效应用于补锌保健品及药品的制备，且通过MTT法、流式细胞术、Hoechst 33258染色法、DNA Ladder及JC‑1染色法实验证明该螯合物具有明显的抗肿瘤生理活性，有望成为治疗癌症尤其是肝癌的高效低毒药剂。

主权项

一种具有抗肿瘤活性的竹荪多糖‑锌螯合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）竹荪多糖的提取：将干燥的竹荪子实体粉碎后，沸水浴提取多糖，浓缩，真空冷冻干燥；（2）竹荪多糖的分离：用Sevage法对竹荪多糖除蛋白后，加入乙醇，3000 ~ 6000 r/min离心10 ~ 20 min，弃去上清液，将沉淀溶解于蒸馏水，重复3 ~ 5次，将得到的溶液冷冻干燥，得到竹荪多糖；（3）竹荪多糖的纯化：把步骤（2）得到的竹荪多糖溶于水，用DEAE‑52纤维素离子交换层析柱纯化，以0.05 ~ 2 mol/L NaCl溶液为洗脱剂，收集洗脱液，再用Sephadex G‑200葡聚糖凝胶色谱柱纯化，以0.05 ~ 2 mol/L NaCl溶液为洗脱剂，收集洗脱液，浓缩，冷冻干燥，得到螯合用的竹荪多糖；（4）在竹荪多糖溶液中加入无机锌源进行螯合反应：将无机锌盐溶于蒸馏水配成1 ~ 3 mg/mL的溶液，用0.5 ~ 2 mol/L的盐酸溶液调节pH 2.0~3.0，使无机锌盐充分溶解，再按多糖与无机锌盐质量比为1 ：1 ~ 1 ：3加入3 ~ 5 mg/mL的竹荪多糖溶液，漩涡混匀，用5% ~ 10%的氨水溶液调节pH 8.0 ~ 10.0,温度保持在45 ~ 65 ℃下震荡反应36 ~ 50 h；（5）将反应液浓缩后加入3 ~ 5倍体积的无水乙醇将产物沉淀出来，抽滤，用60% ~ 80%的乙醇洗涤，沉淀，最后用无水乙醇洗涤，沉淀;（6）冷冻干燥，得抗肿瘤活性竹荪多糖‑锌螯合物，所得抗肿瘤活性竹荪多糖‑锌螯合物能抑制肝癌细胞HepG2、乳腺癌肿瘤细胞MCF‑7、胃癌细胞SCG‑7901、肺癌细胞A549、子宫颈癌细胞Hela以及前列腺癌细胞PC3的增殖。