一种大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条及其制备方法

摘要

本发明公开一种大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条，涉及生物检测技术领域，包括有支撑被衬，该支撑被衬上依次粘贴有包被膜、标记垫和样品垫，在所述支撑被衬的手持端粘贴有吸水垫；所述标记垫包被有抗大片形吸虫ES抗原的7D1单克隆抗体，所述包被膜上前部设有检测线，所述包被膜上后部设有质控线，所述检测线包被有抗大片形吸虫ES抗原的7D4单克隆抗体，所述质控线包被有兔抗小鼠免疫球蛋白抗体，与现有技术相比，本发明的试纸条操作简便，不需要本领域的专业人员和专业设备仪器，能满足不同层次人员和部门的需要，尤其是基层单位的需要，并且具有快速、准确、灵敏、特异、价格低廉等优点。

主权项

一种大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条制备方法，其特征在于：所述试纸条包括有支撑被衬（1），该支撑被衬上依次粘贴有包被膜（4）、标记垫（3）和样品垫（2），在所述支撑被衬（1）的手持端（1‑1）粘贴有吸水垫（5）；所述标记垫（3）包被有抗大片形吸虫ES抗原的7D1单克隆抗体，所述包被膜（4）上前部设有检测线（T），所述包被膜（4）上后部设有质控线（C），所述检测线（T）包被有抗大片形吸虫ES抗原的7D4单克隆抗体，所述质控线（C）包被有兔抗小鼠免疫球蛋白抗体；所述样品垫（2）由玻璃纤维膜制成，所述标记垫（3）由聚酯纤维膜制成，所述包被膜（4）为硝酸纤维素膜，所述吸水垫（5）为粗纤维吸水纸，所述支撑被衬为聚氯乙烯板；其中，所述标记垫（3）包被的7D1单克隆抗体为胶体金标记的抗大片形吸虫ES抗原的7D1单克隆抗体；所述的大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条的制备方法，其特征在于其制备步骤如下：A、包被膜（4）的制备：a.用硝酸纤维素膜制成包被膜（4），并在包被膜（4）上同一面靠近标记垫（3）端设置有检测线（T），另一端设置有质控线（C）；b. 将抗大片形吸虫ES抗原的7D4单克隆抗体稀释至包被浓度为0.15 mg/mL ‑0.50 mg/mL，按包被量为每垫0.5μL ‑5μL得到检测包被液，并将其包被在检测线（T）上，该检测线（T）能够识别抗大片形吸虫ES抗原；c. 将兔抗小鼠免疫球蛋白抗体稀释至0.10 mg/mL ‑0.50 mg/mL的浓度，按包被量为每垫0.5μL ‑5μL得到质控包被液，并将其包被在质控线（C）上，干燥，密封保存即得包被膜（4）；B、标记垫（3）的制备：a.对抗大片形吸虫ES抗原的7D1单克隆抗体进行胶体金的制备和单克隆抗体标记；b.将胶体金标记的抗大片形吸虫ES抗原的7D1单克隆抗体1:5稀释后，以每垫5μL‑25μL的量喷点在标记垫进行包被，然后将标记垫干燥、密封保存即得标记垫（3）；所述抗大片形吸虫的ES抗原的7D1单克隆抗体能特异识别大片形吸虫ES抗原；C、样品垫（2）的制备：用玻璃纤维膜制成样品垫（2）；D、将包被膜（4）、标记垫（3）、样品垫（2）依次从下往上搭接好后粘贴在支撑被衬（1）上，最后将吸水垫（5）搭接包被膜（4）上，即得到大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条，其中，B步骤中将标记垫干燥的温度为36°C‑38°C；所述兔抗小鼠免疫球蛋白抗体的制备方法是，把质量浓度为1mg/mL的小鼠免疫球蛋白与弗氏完全佐剂按1：0.5‑1.5比例混匀，按0.5ml‑2.0ml /只兔子的剂量对兔子进行脚掌皮下注射免疫；6‑8天后，用质量浓度为2mg/ml的小鼠IgG与弗氏不完全佐剂按1：0.5‑1.5比例混匀，以0.5ml‑2.0ml/只兔子的剂量对上述兔子进行胭淋巴结注射二次免疫；9‑11天后，按二次免疫的方法加强免疫一次，免疫后，定期耳静脉采血测定血清效价，血清效价到达后，心脏采血，分离血清；采用常规的辛酸—饱和硫酸铵法初步纯化后，再用 protein G 蛋白柱进一步纯化；当用常规的琼脂扩散试验测定的兔抗小鼠免疫球蛋白抗体效价为1:10⁴，用BCA蛋白浓度试剂盒测定兔抗小鼠免疫球蛋白抗体浓度为1.22 mg/ml时，兔抗小鼠免疫球蛋白抗体的制备完成，在4℃的条件下保存待用。