重组AAV-CRUMBS同源物组合物及治疗LCA-8和进行性RP的方法

摘要

本发明涉及toa Crumbs同源物(CRB)治疗剂，其用作药物或用于治疗或预防的方法，例如用于治疗或预防归因于Crumbs同源物‑1(CRB1)基因突变的视网膜病症，例如先天性利伯氏黑蒙8(LCA8)或色素性视网膜炎12(RP12)。特别的，本发明涉及包含CRB2或修饰的无毒形式的类似于CRB2的CRB1或CRB3的重组病毒载体。

主权项

用作药物的基因治疗载体，其中基因治疗载体包含至少下述之一：a)编码Crumbs同源物‑2(CRB2)蛋白的核苷酸序列；和b)编码修饰的Crumbs同源物‑1(CRB1)蛋白或修饰的Crumbs同源物‑3(CRB3)蛋白的核苷酸序列，其中修饰的CRB1蛋白或修饰的CRB3蛋白包含蛋白C末端部分的修饰并且在体内测定中毒性较低或无毒，该测定包含步骤：i)用含有编码修饰的CRB1或修饰的CRB3蛋白的核苷酸序列的重组腺相关病毒(rAAV)在Crb2条件敲除(cKO)或Crb1Crb2^F/+cKO小鼠的一只眼睛内进行玻璃体内转导；ii)用包含编码野生型CRB2蛋白、野生型CRB1或野生型CRB3的核苷酸序列的rAAv在小鼠的另一只眼睛中进行玻璃体内转导作为对照；和iii)在转导后一个月和三个月制作视网膜电流图，其中，与野生型CRB1或野生型CRB3转导的视网膜中的视网膜电流图相比，修饰的CRB1或修饰的CRB3转导的视网膜中视网膜电流图的最大a‑波和/或b‑波波幅百分比增加表明修饰的CRB1蛋白或修饰的CRB3蛋白毒性较低；或者，其中视网膜电流图中的最大a‑波和/或b‑波波幅是修饰的CRB1或修饰的CRB3蛋白的最大a‑波和/或b‑波波幅减去野生型CRB2的最大a‑波和/或b‑波波幅的差的至少60％，则表明修饰的CRB1蛋白或修饰的CRB3蛋白是无毒的。