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一种硫酸软骨素中硫酸角质素的纯化与检测方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)检测硫酸软骨素混合物中的硫酸角质素①将硫酸软骨素混合物脱乙酰反应,得硫酸软骨素混合物脱乙酰产物;②用亚硝酸降解步骤①所得脱乙酰产物,得硫酸软骨素混合物二糖;③将步骤②所得硫酸软骨素混合物二糖浓缩至干并溶解于水,调节pH值为碱性,加入吡唑啉酮类衍生试剂,反应完成后用氯仿萃取三次去除未反应的衍生试剂;④用液相色谱(LC)法或液相色谱质谱联用(LC‑MS)法分析步骤③所得产物;LC和LC‑MS分析,液相条件:液相柱5μm 0.3×250mm SB‑C18 Agilent色谱柱,流速15μL/min,流动相A为0.01mol/L乙酸铵溶液,流动相B为乙腈,上样量为0.02uL,流动相条件:流动相17%B 0‑60min内线性增加到22%,紫外检测器DAD 245nm检测,质谱条件:LTQ‑XL质谱仪,负离子检测模式;(2)分离纯化硫酸软骨素混合物中的硫酸角质素将硫酸软骨素混合物溶于去离子水,配置成质量体积比为2‑5%的水溶液,经阴离子交换柱分离,用不同浓度氯化钠水溶液洗脱,收集氯化钠浓度为1.5mol/L的洗脱液,浓缩、透析、脱盐后冷冻干燥;(3)检测硫酸角质素的含量①将纯化后的硫酸角质素脱乙酰反应,得脱乙酰硫酸角质素;②用亚硝酸降解步骤①所得脱乙酰硫酸角质素,得硫酸角质素二糖;③将步骤②所得硫酸角质素二糖浓缩至干并溶解于水,调节pH值为碱性,加入吡唑啉酮类衍生试剂,反应完成后用氯仿萃取三次去除未反应的衍生试剂;④用液相色谱(LC)法或液相色谱质谱联用(LC‑MS)法分析步骤③所得产物;LC和LC‑MS分析,液相条件:液相柱5μm 0.3×250mm SB‑C18 Agilent柱,流速15μL/min,流动相A为0.01mol/L乙酸铵溶液,流动相B为乙腈,上样量为0.02uL,流动相条件:流动相17%B 0‑60min内线性增加到22%,紫外检测器DAD 245nm检测,质谱条件:LTQ‑XL质谱仪,负离子检测模式。 |