一种快速准确鉴定评价黑木耳种质资源的方法及黑29品种特异性分子身份证

摘要

本发明公开了一种快速准确鉴定评价黑木耳种质资源的方法及黑29品种特异性分子身份证，通过SSR分子标记对黑木耳品种进行研究，采用资源特征分析软件分析研究结果，将研究结果量化，得出字符串形式的结果，构建黑木耳品种分子身份证特异性指纹图谱。分子身份证把品种特征数字化，这样可简单明了地区分不同黑木耳品种间的差异，这种分子身份证可用于黑木耳品种的真伪鉴定和遗传关系分析，为黑木耳品种的知识产权保护提供了有效的科学依据。在黑木耳品种鉴定评价时，只需将黑木耳品种与已有特异性分子身份证比较分析，即可确定其是否为已通过审定的黑木耳品种。这大大降低了黑木耳种质资源鉴定评价的时间和费用，提高了黑木耳品种鉴定评价的效率。

主权项

一种快速准确鉴定评价黑木耳种质资源的方法，其特征在于所述方法步骤如下：(1)母种活化将母种从保藏状态恢复到室温状态，将母种转接到cPDA固体培养皿中央，25℃恒温避光培养8d活化备用；(2)液体培养接种时用0.5cm打孔器在相同菌龄处打孔，接种锥形瓶中，每瓶锥形瓶中装有液体PD培养基200mL，每个锥形瓶接种10个接种块，120r/min，25℃恒温避光培养10d；(3)菌丝收集液体摇瓶菌丝体用四层纱布过滤，过滤后的菌丝体用蒸馏水冲洗表面杂质，收集的菌丝体于‑20℃保存备用；(4)总DNA提取采用植物基因组DNA提取试剂盒提取总DNA；(5)总DNA质量检测采用DYY‑12型电泳仪用1.0％琼脂糖凝胶电泳检测；采用UV757CRT紫外分光光度计检测总DNA浓度，测定A260值和A280值，样品稀释到50mg/μL，‑20℃保存备用；(6)SSR引物SSR引物如表1所示：表1 SSR引物表(7)SSR扩增扩增体系：2.0μL 10×Ex Taq Buffer，2.0μL 0.2mmol/L dNTP，1.0μL 0.5μmol/L上游引物，1.0μL 0.5μmol/L游引物，0.5U DNA聚合酶，1.0μL 50ng/μL模板DNA，ddH₂O补至20μL；扩增程序：94℃预变性5min；94℃变性30s，54～60℃复性30s，72℃延伸2min，35个循环；72℃延伸7min，退火温度如表1所示；电泳成像：采用BIO‑RAD凝胶成像系统拍照并记录电泳结果；(8)数据统计分析对SSR扩增产物的电泳结果进行人工比对、校正，有条带记为1，无条带记为0，构建初始0、1数据矩阵；(9)资源特征分析软件分析采用资源特征分析软件ID Analysis软件按照SSR引物编号顺序，构建黑木耳种质资源的特异性分子身份证；(10)新品种鉴定评价当黑木耳品种需要鉴定评价时，以待检测黑木耳品种为实验材料，执行步骤(1)‑(9)，通过与已有特异性分子身份证比较分析，即可确定其是否为已通过审定的黑木耳品种。