Flow-through膜载体量子点检测吗啡试纸的制备及应用

摘要

本发明公开了Flow‑through膜载体量子点检测吗啡试纸的制备及应用，属于膜载体量子点荧光免疫印迹技术。本采用硝酸纤维素薄膜为固相载体，利用其印迹作用在其表面包被吗啡抗原，用牛血清白蛋白封闭非特异性位点，将吗啡特异性抗体与带羧基水溶性CdTe@ZnS量子点在1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺/ N‑羟基琥珀酰亚胺作用下进行偶联标记，制备得到量子点标记吗啡荧光抗体，利用抗体与抗原的特异性结合及Flow‑through膜载体印迹吸附作用，达到检测效果。制备过程简单，制备产品理化性能好、检测灵敏度较高的快速检测试纸条的方法。通过Flow‑through膜上荧光强度的变化从而定性检测样本中吗啡含量。本发明较酶联免疫快速检测方法的制作成本低廉，检测方法简便快速，检测结果明显直观。

主权项

吗啡的Flow‑through膜载体量子点荧光免疫印迹快速检测试纸条的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：Flow‑through膜的预处理：硝酸纤维素薄膜用铅笔画直径为5mm圆孔，用磷酸缓冲盐溶液(PBS)（浸泡15min，取出用蒸馏水冲干净，将试纸条紧贴蒸馏水打湿平铺的滤纸，每孔均匀滴加20μL吗啡特异性抗原，37℃温育30min，用牛血清白蛋白(BSA)封闭抗原上非特异性位点，37℃温育30min，用含吐温磷酸盐缓冲液(PBST)洗涤三遍，37℃干燥，4℃干燥保存；(2) 羧基水溶性CdTe@ZnS量子点标记吗啡特异性抗体的制备：将羧基化CdTe@ZnS用硼酸缓冲液稀释至1μM于圆底烧瓶，磁力搅拌；加入43μL浓度为3.73mg/mL的吗啡特异性抗体，混合均匀(搅拌速度不易过快，以不产生气泡为准)；搅拌5min后，调低搅拌速度，加入13μL的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺 (EDC)溶液，反应20min后加入15μLN‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温反应2h；反应结束，用冷冻离心机12000rpm离心3min除团聚；(3) 羧基水溶性CdTe@ZnS量子点标记吗啡特异性抗体的纯化：用超滤管将样品纯化5次，终产物复溶于PBS缓冲液中；终产物取出后12000rpm离心3min除团聚，测定浓度后保存于4℃备用。