同时检测单细胞mRNA表达水平和端粒长度的方法

摘要

一种同时检测单细胞mRNA表达水平和端粒长度的方法。包括：(1)单细胞的捕获和裂解；(2)单细胞mRNA和gDNA的分离；(3)单细胞mRNA的扩增和端粒特异性序列的扩增；(4)qPCR检测单细胞基因表达；(5)单细胞相对端粒长度的检测。该方法可以有效地对单细胞进行裂解并释放完整的mRNA和gDNA，然后用生物素标记的引物捕获mRNA，磁珠吸附生物素后将mRNA和gDNA进行物理分离，对单细胞的基因表达和长度分别进行检测，最后可获得同一个细胞的基因表达水平和端粒长度并进行关联分析。本发明所述检测方法准确性和灵敏度高，方法简便，可在单细胞水平对哺乳动物各种细胞进行平行的基因表达和端粒长度检测。

主权项

一种同时检测单细胞mRNA表达水平和端粒长度的方法，该方法包括：第1步、同时获得完整的gDNA和RNA，采用Qiagen RLT Plus裂解单细胞以达到同时释放gDNA和RNA的目的，使用生物素标记的Oligo‑dT对含有Ploy(A)的mRNA进行杂交捕获；第2步、使用能够特异性吸附生物素的磁珠将mRNA和gDNA进行分离，上清中即为游离的gDNA，管壁磁珠中为mRNA；第3步、将管壁磁珠中分离获得的单细胞mRNA进行反转录成第一链cDNA，并对其进行扩增，扩增产物纯化后，对看家基因GAPDH和Actin表达情况进行qPCR调查，排除看家基因未被扩增的单细胞样品；第4步、将上清中的gDNA全部转移至新的PCR管中，纯化后用EB溶解gDNA，然后直接向管中加入端粒和内参基因Alu引物进行预扩增反应，对扩增产物进行纯化后分别用于端粒和Alu的qPCR定量分析。