发明名称 |
利用免疫共沉淀与Western blot技术相结合来检测血清中蛋白的方法 |
摘要 |
本发明公开了一种利用免疫共沉淀与Western blot技术相结合来检测血清中蛋白的方法。取Dynabeads Protein G超纯水清洗,用EBC裂解液再清洗,溶于EBC裂解液中平均分成两份,对两份Dynabeads Protein G溶液进行分别孵育处理,再混合孵育获得产物,产物弃上清用EBC裂解液清洗三次,得到的沉淀用EBC裂解液重悬,再加入SDS上样缓冲液煮沸,用Western blot方法检测目的蛋白。本发明方法简单有效,特异性好,且准确率极高。因此避免了传统的用于血清中蛋白检测的ELISA方法产生的背景高,准确性低等缺点。 |
申请公布号 |
CN105938147A |
申请公布日期 |
2016.09.14 |
申请号 |
CN201610307153.X |
申请日期 |
2016.05.10 |
申请人 |
浙江大学 |
发明人 |
章晓波;陈玉磊 |
分类号 |
G01N33/68(2006.01)I |
主分类号 |
G01N33/68(2006.01)I |
代理机构 |
杭州求是专利事务所有限公司 33200 |
代理人 |
林超 |
主权项 |
一种利用免疫共沉淀与Western blot技术相结合来检测血清中蛋白的方法,其特点在于包括以下步骤:1)取40~60μl Dynabeads Protein G,超纯水清洗三次后,用1ml的EBC裂解液再清洗两次,将清洗后的Dynabeads Protein G溶于200μl的EBC裂解液中,平均分成两份;2)对两份Dynabeads Protein G溶液进行分别孵育处理,再混合孵育获得产物;3)将步骤2)得到的产物弃上清,用EBC裂解液清洗三次,得到的沉淀用50~100μl EBC裂解液重悬,再加入SDS上样缓冲液在100℃煮沸10min;4)用Western blot方法检测步骤3)得到的产物,检测目的蛋白。 |
地址 |
310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号 |