一种海洋芽孢杆菌多肽及其制备和应用

摘要

一种海洋芽孢杆菌多肽及其制备和应用，属于海洋微生物医药技术领域，来源于南极的海洋芽孢杆菌N11‑8发酵培养后的代谢产物，该活性多肽的N‑端15个氨基酸序列为ASTGSQKVTVYAVAD；该活性多肽对人肝癌细胞BEL‑7402、人卵巢癌细胞NIH:OVCAR‑3、人肾透明细胞腺癌细胞786‑0和人大细胞肺癌细胞NCI‑H460等多种肿瘤细胞具有较强的细胞毒性，具有较好的研究和应用价值，该多肽可应用于制备上述癌症的预防和/或治疗药物中。

主权项

一种海洋芽孢杆菌多肽，其特征在于所述多肽来源于南极的海洋芽孢杆菌N11‑8发酵培养后的代谢产物，所述多肽的N‑端15个氨基酸序列为ASTGSQKVTVYAVAD；所述多肽的分子量，ESI质谱显示19kDa，SDS‑PAGE电泳显示15.8kDa，所述海洋芽孢杆菌N11‑8的发酵培养条件为，发酵液中各成分的终浓度为牛肉膏1～6g/L、蛋白胨7.5～12.5g/L、氯化钠2～7g/L、pH6.0～8.0，在1.05kg/cm²，115～121℃，15～35min的条件下灭菌，在150～250r/min、20～33℃的条件下在恒温震荡摇床中培养48～72h；所述多肽的获得方法为将海洋芽孢杆菌N11‑8的发酵培养后的代谢产物过超滤膜，取分子量为3～30kDa的组分，将分子量为3～30kDa的组分用硫酸铵沉淀，获得硫酸铵的浓度小于45～60％(质量百分比浓度)的样品溶液，将所述溶液进行阴离子交换层析，经MTT法检测各峰组分的抗肿瘤活性，显示穿透峰Q2具有最佳抗肿瘤活性，选取穿透峰Q2的样品，进行亲水分子排阻色谱层析，流动相A为甲醇，流动相B为超纯水，上样量100～500μL，程序为：流速2～5mL/min，0～10min，A从0升到5％，B从100％降到95％，10～15min，A保持为0，B保持为100％；检测波长为280nm，收集各峰，检测各峰组分的抗肿瘤活性，峰P1和峰P2有活性，其中峰P1活性最佳，将其命名为海洋芽孢杆菌多肽。