一种共提取DNA/RNA病毒核酸的方法

摘要

本发明提供一种共提取DNA/RNA病毒核酸的方法，用含RNA助沉剂的异硫氰酸胍裂解液裂解经生理盐水稀释标本，使标本中不同核酸病毒的DNA或RNA释放游离于裂解液中，加入磁珠，形成磁珠‐核酸复合物，洗涤后获得核酸洗脱液。本发明基于纳米磁珠创建了一种新型从呼吸道标本提取DNA和RNA的方法，整个过程不需用到苯酚、氯仿，β‐巯基乙醇等有毒试剂，省时省力。本发明从呼吸道标本同提取DNA和RNA，也适用于其他如尿液、血液等不同类型样本的核酸共提取，高效除去蛋白质等杂质，减少核酸降解，实现了在同一管内同时检测DNA病毒和RNA病毒的目的。本发明简便、快速、安全，特别适用于荧光定量PCR等检测。

主权项

一种共提取DNA/RNA病毒核酸的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)在经处理后的呼吸道标本中加入300μl病毒裂解液及6μl RNA助沉剂振荡混匀，置于60℃金属浴中保温10min；(2)待上述裂解物冷却至室温后，加入纳米磁珠，加入1倍体积的无水乙醇，上下颠倒混匀充分，使核酸与纳米磁珠结合，在磁场作用下，磁珠聚集，磁珠‑核酸复合物和液体分离；(3)使用70％的乙醇洗去复合物表面蛋白质、脂质及盐离子等杂质；(4)经洗涤后的纳米磁珠‑核酸复合物加入无菌DEPC水，将核酸从磁珠上面洗脱下来,得到含DNA/RNA病毒核酸洗脱液。