Combinado en paralelo la síntesis automatizada de variantes polinucleótido

摘要

Un método para sintetizar una pluralidad de variantes de polinucleótidos donde cada una tiene por lo menos una diferencia definida de nucleótidos en relación a una secuencia referencial de polinucleótidos, donde el polinucleótido referencial codifica a un polipéptido referencial y cada una de las pluralidades de las variantes de polinucleótidos codifica a un polipéptido que tiene a por lo menos una diferencia de secuencias de aminoácidos en relación al polipéptido referencial, donde el método comprende: (a) amplificar por separado a una plantilla referencial de polinucleótidos con cada una de una pluralidad de parejas de cebadores hacia adelante y en reversa, donde la pluralidad de parejas de cebadores hacia adelante y en reversa comprende a una pluralidad de diferencias definidas de nucleótidos y donde cada pareja genera a un amplicón que comprende a una secuencia capaz de enlazarse a una secuencia superpuesta adyacente de por lo menos un amplicón adicional; (b) ensamblar por separado a una pluralidad de conjuntos de amplicones, donde cada conjunto comprende a amplicones que tienen secuencias superpuestas adyacentes capaces de enlazarse para formar a la longitud completa de la secuencia referencial de polinucleótidos; (c) replicar a la pluralidad de conjuntos de amplicones ensamblados, sintetizando, por lo tanto, a una pluralidad de variantes de polinucleótidos donde cada una de las variantes de polinucleótidos codifica a un polipéptido que tiene a por lo menos una diferencia de secuencias de aminoácidos en relación al polipéptido referencial; y (d) combinar la pluralidad de variantes de polinucleótidos.