一种分离培养动物胚胎肝干细胞方法

摘要

本发明提供了一种分离培养动物胚胎肝干细胞方法。所述方法中，通过将动物胚胎肝脏取出，再进行培养离心纯化，再进一步加入酶除去成纤维细胞，并重复纯化培养，从而能够简单便捷的得到具有高纯度的肝干细胞，进而解决了现有技术中分离纯化培养胚胎肝干细胞操作复杂、成本高的技术问题。本发明方法具有操作简便、效率高，培养得到的肝干细胞纯度高、活性好、增殖速度快、性状稳定等优点。同时也能够为肝脏疾病的基础研究和临床应用提供大量的细胞来源。

主权项

一种分离培养动物胚胎肝干细胞的方法，特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)取出动物胚胎的肝脏，并用冷PBS溶液充分洗涤后，剪碎，得到肝脏组织块，并对所述肝脏组织块进行洗涤；然后，向清洗后的肝脏组织块中加入胶原酶溶液进行细胞消化，接着加入培养液终止消化，并过滤得到单细胞悬浮液；将所述单细胞悬浮液离心后，收集上清液；然后，将离心所得沉淀细胞制成悬浮液，并二次离心，然后收集二次离心上清液；然后，将两次收集的上清混合后，并三次离心然后收集沉淀细胞，即为三次离心沉淀细胞，然后将三次离心细胞制成悬浮液后，再次离心除去悬浮液中的上清液后，在沉淀细胞中加入含有生长因子的培养基，并接种于培养皿中进行培养；(2)培养一段时间后，向培养基中加入胰酶，并通过消化除去培养中产生的成纤维细胞，然后除去胰酶，并继续培养，从而得到纯化的肝干细胞。