一种双水相萃取-超声波联合分离提纯木瓜蛋白酶的方法

摘要

本发明提供了一种双水相萃取‑超声波联合分离提纯木瓜蛋白酶的方法，具体操作步骤为：将木瓜汁采用反复冻融的方法破壁后收集上层清液得到木瓜蛋白酶粗提液，再采用羟甲基纤维素钠‑无机盐双水相萃取，并置于超声波中超声15‑20分钟，再静置8‑15分钟，取上相在截留相对分子质量为5000的透析膜中透析12‑20小时后，再经冷冻干燥得木瓜蛋白酶粉末。本发明双水相萃取和超声波联合的方法对木瓜蛋白酶进行提纯，具有选择性高，体系分相速度快的优点，且操作简便，设备常规，适合工业化生产。本发明所述方法制得木瓜蛋白酶末中木瓜蛋白酶纯度高达97.1％，总收率高达84.2％。

主权项

一种双水相萃取‑超声波联合分离提纯木瓜蛋白酶的方法，其特征在于，所述分离提纯木瓜蛋白酶的方法包括如下步骤：(1)粗提液制备：将木瓜乳汁加入水中浸泡4‑6小时后，于‑20℃下冷冻3‑8小时后，再于25℃融化，如此反复冻融3～4次破壁，再将所得溶液离心处理后，收集上清液即为含木瓜蛋白酶的粗提液；(2)双水相萃取：向步骤(1)所得含木瓜蛋白酶的粗提液中加入羟甲基纤维素钠和无机盐，震荡混合后，超声15‑20分钟，再静置8‑15分钟，收集上相；(3)成品制备：将步骤(2)所得上相在截留相对分子质量为5000的透析膜中透析12‑20小时后得木瓜蛋白酶水溶液，再于‑15～‑10℃冷冻干燥12‑20小时得木瓜蛋白酶粉末。