儿童活动性结核病蛋白特征谱及其构建方法

摘要

本发明公开了一种儿童活动性结核病蛋白特征谱及其构建方法。本发明通过比较活动性结核病组与健康对照组蛋白质组学差异，获得儿童活动性结核病的蛋白特征谱。此外，本发明还涉及儿童活动性结核病蛋白特征谱的构建方法，利用相对和绝对定量的非标记串联质谱技术，能有效地对血浆里的蛋白进行鉴定和相对定量，采用该技术能获得儿童活动性结核病人血浆中的蛋白表达差异质谱。本发明所发现的一系列蛋白质为寻找新的更理想的标志物提供了基础和资源；与以往的血浆学检测方法比较具有较高的敏感性和特异性，并能用于筛选儿童活动性结核病的药物中；本发明同时也为探索疾病发生发展的机制提供了新的思路。

主权项

一种非诊断目的的儿童活动性结核病相关蛋白特征谱的构建方法，包括如下步骤：分别从儿童活动性结核病患者组和健康对照儿童组的离体血浆中提取总蛋白，用胰蛋白酶进行酶解，对酶解所得多肽进行液相色谱‑电喷雾电离串联质谱检测和相对定量分析，根据分析结果获得儿童活动性结核病相关蛋白特征谱；所述儿童活动性结核病相关蛋白特征谱中，所述儿童活动性结核病患者组和所述健康对照儿童组中表达差异的蛋白质包括表达上调的蛋白质和表达下调的蛋白质；所述表达上调的蛋白质有PTCD3、ADAMTSL2、HTT、SNX4、VPS37B、RANBP17、UBE2O、VWDE、MCM4、ZC3H11A、WIZ、CCDC81、DSP、MMP2、GEMIN5、SPIRE2、PC、ADCY3、LIMS2、WWC1、RP1、ADAM18、AARSD1、PCSK6、ST3GAL4、ZNF584、ZMYM1、XB、LRRK2、SOCS5、RASAL3、SMC3、ATP10A、KDM1A、TTLL10、HERC6、PCCA、C1QTNF1、NUP88、SORBS1、NKD2、PIWIL4、AKAP2、SYNM、NPM1、HP、NOS1、NLRP14、SKIV2L、ICE1、ASAP2、ABAT、ORM1、CASK、SPECC1、NIPBL、DOCK11、CACTIN、ZNF526、SYNRG、FANCD2、PLXNC1、SPATA31D1、FBXO46、PSG3、BMPR2、DKFZp434A2017、KIF4A、COX10、ARHGDIG、RASAL2、MYH7、RFC1、DOCK5、ATP11A、ANKRD27、ZNF521、ZNF281、DLL1、TBL3、MYH14、EML4、CLTCL1、PRRC2C、TSTD2、C1orf94、NSD1、GPR137B、FRMPD2、ANKRD33B、SIN3A、TAS1R1、KIF3C、CYP26B1、HERC2、DCAF12L2、CCDC15、SP140、ABCC12、WDR91、SEC31A、GTPBP3、TLR4、CHMP4B、HECW1、CP、C16orf71、PPP2R5D、COL13A1、ZBTB10、ZNF311、PINLYP、AIM2、KCNMB3、HAL、MTHFD1、ALPP、PPP1R9A、IFT81、DDX60、CCDC71、RNF152、UBR4、ASH1L、CORO1C、ACAN、NARG1L、ZNF831、ABCA2、HCFC1、REXO1、TRIP12、PCNT、CAD、AK3、GUSB、SERPINA1、MTUS2、ZNF606、ARAP3、DZIP1、POLR3C、NLRP13、IFNA14、DNAH7、GPAM、SAMD9L、LMO3、USP11、RASGRF2、TATDN2、DCAF17、POFUT2、LAMA2、AXIN2、AP2A2、KIAA1033、HPS6、SORT1、TNPO3、NHLRC1、ADAM15、SLC25A41、CLEC14A、SERPINA3、DRG2、SYCP1、MRPS18B、ATP12A、SERPING1、MACF1、RSAD1、VPS13D、TTC3、RIMS1、GRK6、SP110、SOWAHC、HDGFRP3、POLR2A、C10orf76、INTS2、PROZ、MYO7B、TRMT1、ARHGEF1、LCE3A、SLC38A10、A2M、PAMR1、MCM5、ANK2、KLK8、PRG4、ZMYM3、PPP2R1B、TSSK4、INPP5B、SKIL、ZNF543、SLCO3A1、ATR、MID2、ZFP57、TICRR、XRCC4、SPTBN2、AHCTF1、C2CD3、ZC3H12B、LOX、PLOD3、ACACB、SDK2、C9orf85、CASP8、PLAA、KAT8、UTRN、MROH8、DMTN、SAA1、NRXN2、LEPREL4、SMC5、SPATA31C1、SAMHD1、PIAS3、L1CAM、JADE1、PKD1L1、MDC1、FAT2、PSD4、TAP1、CEP290、TTC28、ABCA7、LONP2、RGAG1、TAB2和TRPM5；所述表达下调的蛋白质有KIAA1211、CGN、DDAH1、HHIP、CLIC3、PPP6C、PNN、PRPF8、KIT、GLMN、CCDC89、DNAH14、COL6A2、GFRA1、PRPF6、KIAA0319、ATP13A1、PHKG2、COL7A1、TRIP6、TRIM14、DNAJC1、PHLDB3、ICA1、PRPF4B、TFAP4、LACTB、CEP63、MYO19、ARHGAP19、ANKRD17、EYS、PRDM9、TIGD5、ECHDC3、RHBDF1、GLG1、TMEM141、TNS1、GDPD3、LYST、HRH3、HBD、MZF1、FLYWCH1、OVOL2、HSPA5、ZNF30、ZNF492、FRAT1、AHSG、PIK3R6、KANSL1、MUC12、ESCO1、MIEF1、CACNA1E、DPYSL3、CHD7、ADCY9、EIF5、DDX31、RIT1、TECTA、RAB3GAP2、APOC3、RNF144B、SF3B4、ZNF709、EVC2、RB1CC1、MYH13、TIAM2、SEMA4A、COBLL1、UHRF1BP1L、SPTAN1、BCOR、SMG1、DPYD、RNASE4、PCCB、WDR62、BRD4、RBM26、DOPEY2、ZMYM5、RAB11FIP1、INADL、ZNF19、WNK1、WDR46、DAOA、ADIPOQ、F11、GOLGA4、ALK、TANGO6、BCL9L、COL4A1、CLEC2B、PDLIM1、CD22、EFNB2、COL8A2、NXF2、RNF180、ADAMTSL3、TTI2、LRP4、CDC37、CHD6、OCRL、ANO7、GBA2、PCF11、AGO3、CPT2、KMT2A、RASA3、ZNF431、CHIC1、ISCA2、BRINP1、MTO1、CASP2、MKI67、CNTRL、RPP40、DOK3、KRT82、FNDC1、WFDC5、KRT12、PTGDR2、BEND2和ZNF225；所述液相色谱‑电喷雾电离串联质谱检测过程中，色谱为毛细管高效液相色谱，色谱条件如下：色谱柱的填料为反向碳18，内径为150μm，柱长100mm，流动相由A液和B液组成，所述A液为含有体积百分含量为2％的乙腈和体积百分含量为0.1％的甲酸的水溶液，B液为含有体积百分含量为84％的乙腈和体积百分含量为0.1％的甲酸的水溶液；采用所述A液和所述B液按照如下进行梯度洗脱：0min‑100min，所述流动相中所述B液的体积百分含量由0％匀速增加至45％；100min‑108min，所述流动相中所述B液的体积百分含量由45％匀速增加至100％；108min‑120min，所述流动相中所述B液的体积百分含量维持在100％；流速为400nl/min。