发明名称 |
一种小鼠或大鼠真皮成纤维细胞的分离培养方法 |
摘要 |
本发明公开了一种小鼠或大鼠真皮成纤维细胞的分离培养方法,开创性的采用了摇床来洗涤和消化处理后的真皮组织,能有效去除血渍及杂质,组织表面没有表皮残留,内面也没有红色的血丝及脂肪组织的残留,保证了成纤维细胞分离的高纯化度。并且消化得到的成纤维细胞活性高,易贴壁,细胞碎片少,为分离培养成纤维细胞提供了一种新的思路和方法。同时,本发明的原代小鼠或大鼠成纤维细胞的分离培养方法,使用特殊制备的复合酶消化液,并使用4℃条件过夜消化(4‑10h),相比传统单一的胶原酶预热消化,不但避免了对组织过度消化过度吹打所导致的细胞活性低、得率差的问题,而且消化的更均匀透彻。 |
申请公布号 |
CN105907701A |
申请公布日期 |
2016.08.31 |
申请号 |
CN201610277788.X |
申请日期 |
2016.04.28 |
申请人 |
王晓冰 |
发明人 |
王晓冰 |
分类号 |
C12N5/071(2010.01)I |
主分类号 |
C12N5/071(2010.01)I |
代理机构 |
上海申新律师事务所 31272 |
代理人 |
竺路玲 |
主权项 |
一种小鼠或大鼠真皮成纤维细胞的分离培养方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1:小鼠或大鼠皮肤组织的提取用剪刀剪取小鼠或者大鼠的皮片,然后去除皮下脂肪及结缔组织,并将皮片剪至大小为4‑5cm<sup>2</sup>;步骤2:真皮层的剥离以及真皮组织的洗涤将步骤1获得的皮片浸泡在II型Dispase酶中,过夜后撕去表皮,将剩余的真皮组织放入透明袋中,往其中加入PBS溶液,密封后放置在摇床上缓慢摇动洗涤,直至真皮组织变成白色;步骤3:酶消化将步骤2获得的真皮组织放入透明袋中,往其中加入复合酶消化液,密封后放置在摇床上缓慢摇动消化,其中复合酶消化液中包括质量比为1:1:1:1的I型胶原酶、II型胶原酶、IV型胶原酶和Dispase酶;步骤4:分离培养成纤维细胞用含血清的细胞培养基终止步骤3中的消化反应,然后将消化完毕的成纤维细胞过70um筛网,之后加入体积对等的PBS溶液,离心后即得到纯化的小鼠或大鼠真皮成纤维细胞,然后用细胞培养基重悬后放置于37℃,5%CO<sub>2</sub>的细胞培养箱中进行培养。 |
地址 |
201600 上海市松江区莘松路1288弄1251号1201室 |