发明名称 |
一种原代小鼠或大鼠神经元的分离培养方法 |
摘要 |
本发明公开了一种原代小鼠或大鼠神经元细胞的分离培养方法,开创性的采用了活检针采取处理后的组织,使得采样直接针对目的细胞,不但直接有效,同时巧妙地避免了表面包膜细胞以及细菌的混入,降低了细胞、细菌污染的同时,大大提高了目的细胞的纯度。同时,本发明的原代小鼠或大鼠神经元细胞的分离培养方法,使用特殊制备的复合酶消化液,相比传统单一的胶原酶预热消化,不但避免了对组织过度消化过度吹打所导致的细胞活性低、得率差的问题,而且消化的更均匀透彻。采用预贴壁以及原代培养早期加入Laminin的方式,可以极大地促进神经元的贴壁、神经突触的生长以及神经网络的形成,从而进一步提高神经元的得率及长期存活率。 |
申请公布号 |
CN105907717A |
申请公布日期 |
2016.08.31 |
申请号 |
CN201610277888.2 |
申请日期 |
2016.04.28 |
申请人 |
王晓冰 |
发明人 |
王晓冰 |
分类号 |
C12N5/0793(2010.01)I |
主分类号 |
C12N5/0793(2010.01)I |
代理机构 |
上海申新律师事务所 31272 |
代理人 |
竺路玲 |
主权项 |
一种原代小鼠或大鼠神经元细胞的分离培养方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1:小鼠或大鼠大脑组织的预处理将小鼠或者大鼠离体的大脑组织用PBS溶液洗涤后,放置在冰上待用;步骤2:取神经元细胞使用活检针刺入步骤1处理后的大脑组织,切取神经元细胞;步骤3:酶消化将步骤2获得的神经元细胞置于复合酶消化液中消化,其中复合酶消化液中包括质量比为1:1:1:1的I型胶原酶、II型胶原酶、IV型胶原酶和Dispase酶;步骤4:分离培养神经元细胞将步骤3消化完毕的骨骼肌细胞过70um筛网,进行离心洗涤,然后进行重悬并再次离心,最后再次用预贴壁培养基重悬,然后预贴壁4h后更换至神经元培养基,细胞放置于37℃,5%CO<sub>2</sub>的培养箱中进行培养。 |
地址 |
201600 上海市松江区莘松路1288弄1251号1201室 |