一种通城虎的组织培养快繁方法

摘要

一种通城虎的组织培养快繁方法，涉及通城虎（Aristolochia fordianaHemsl）通过组织培养技术获得株系稳定的种苗的育苗方法。本发明以通城虎带节藤茎为外植体，通过诱导不定芽、丛生芽增殖培养、试管苗生根以及炼苗移栽等阶段实现了通城虎种苗的组织培养快速繁殖。解决了通城虎大规模种植的种苗供应，也为以通城虎药材为原料的药品生产提供了原料保证。

主权项

一种通城虎的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：（1）诱导不定芽：选取通城虎带节藤茎为外植体,经75%～80%酒精消毒5～15秒种后，用无菌水冲洗2～5次后置于0.1%～0.3%的升汞溶液中消毒10～30分钟，然后用无菌水冲洗3～6次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽，所述的诱导培养基为：以GS为基本培养基，附加2.0%～3.5%蔗糖、0.35%～0.5%琼脂、0.05%～0.1%活性炭、0.05%～0.5%酸性水解酪蛋白以及0.5～2.0mg/L KT、0.1～2.0mg/L IBA和0.1～1.0mg/L 2,4‑D，pH值为5.4～5.8；（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照12～15小时，光照强度为1000～1500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，20～30天转接一次，所述的增殖培养基为：以MS为基本培养基，附加0.2～3.0mg/L 6‑BA、0.1～1.5mg/L NAA 、1.0～6.0mg/L核黄素、0.1～0.5mg/L D‑泛酸钙、1.0～6.0mg/L抗坏血酸、1.0～5.0mg/L L‑半胱氨酸和2.5%～3.5%蔗糖、0.35%～0.5%琼脂、0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8；（3）试管苗生根：将长至2～4cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根，所述的生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，附加0.1～0.8mg/L IBA、0.1～1.0mg/L GGR、0.5～2.5mg/L L‑半胱氨酸和2.0%～2.5%蔗糖、0.4%～0.6%琼脂、0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8；（4）炼苗移栽：将长至6～8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由比例为1：1的泥炭土和河沙混合成的基质中并定植于大田中。