一种基于荧光猝灭的蛋白激酶活性分析方法

摘要

本发明公开了一种基于荧光猝灭的蛋白激酶活性分析方法，该方法首先将靶标蛋白激酶与其对应的荧光标记多肽底物混合，使底物多肽中的特定氨基酸位点发生磷酸化反应，然后利用纳米二氧化铈能够快速、高选择性的吸附生成的磷酸化荧光标记多肽底物，导致其荧光发生猝灭，而未磷酸化的荧光多肽底物与二氧化铈的相互作用非常微弱，不会造成荧光信号的猝灭，因此，通过监测体系中荧光信号的猝灭情况，即可实现蛋白激酶活性的准确分析。本发明只需将蛋白激酶反应体系与纳米二氧化铈混合后即可直接进行荧光信号的测量，利用简便的操作步骤实现了蛋白激酶活性的即混即测型快速分析。同时本发明方法可应用于蛋白激酶抑制剂的筛选。

主权项

一种基于荧光猝灭的蛋白激酶活性分析方法，其特征在于它由下述步骤组成：(1)将已知活性的蛋白激酶与其对应的荧光标记多肽底物混合进行磷酸化反应；(2)将纳米二氧化铈水溶液与步骤(1)中磷酸化反应后的溶液混合，按照每微摩尔荧光标记多肽底物加入10～80mg纳米二氧化铈，且控制混合体系中纳米二氧化铈的浓度为15～120μg/mL，检测混合体系的荧光强度，根据不同活性蛋白激酶对应的荧光强度绘制标准曲线；(3)按照上述步骤(1)和(2)测试待测蛋白激酶对应的荧光强度，根据标准曲线即可实现待测蛋白激酶活性的定量分析。