基于核酸外切酶Ｉ循环酶切放大的赭曲霉毒素A荧光偏振快速检测方法

摘要

本发明属于分子生物学及荧光检测技术领域，涉及一种基于核酸外切酶Ｉ循环酶切放大的赭曲霉毒素A荧光偏振快速检测方法，该方法利用核酸适配体与单链荧光标记寡核苷酸探针杂交形成双链复合物，该复合物能够与OTA发生特异性链置换反应并释放出荧光标记探针和OTA‑核酸适配体复合物，从而引发ExoI对单链荧光标记寡核苷酸探针以及OTA‑核酸适配体复合物的酶切反应释放出OTA；释放出的OTA能够引发下一个链置换反应和酶切反应，依次循环，实现信号放大。本发明解决现有依赖抗体的OTA快检方法中易出现交叉反应、灵敏度不高、成本过高等缺点，具有操作简单，方便快捷的优点。

主权项

一种基于核酸外切酶I循环酶切放大的赭曲霉毒素A荧光偏振快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：(1)赭曲霉毒素A核酸适配体与单链荧光标记寡核苷酸探针杂交形成核酸适配体双链复合物，所述的赭曲霉毒素A核酸适配体序列为5’‑CTTCGGGTGTGGGTGGCATTCCGGTAGGCTCTG‑3’；单链荧光标记寡核苷酸探针(FAM‑probe)序列为5’‑FAM‑CAGAGCCTAC‑3’；(2)链置换反应和酶切反应的循环：赭曲霉毒素A与核酸适配体双链复合物发生特异性链置换反应，产生单链荧光标记寡核苷酸探针以及赭曲霉毒素A核酸适配体复合物，从而引发核酸外切酶I对单链荧光标记寡核苷酸探针以及赭曲霉毒素A核酸适配体复合物的酶切反应释放出赭曲霉毒素A；释放出的赭曲霉毒素A能够引发下一个链置换反应和酶切反应，依次循环一定次数；(3)检测反应体系以及空白对照的荧光偏振强度：空白对照的荧光偏振强度值为P0，反应体系的荧光偏振强度值为P，根据荧光偏振强度值的变化值ΔP＝P0—P的标准曲线确定待检测体系中赭曲霉毒素A的浓度。