快速溶剂萃取-凝胶色谱净化-LC/MS/MS结合测定蜂花粉中硝基咪唑类药物的方法

摘要

本发明涉及一种蜂花粉中硝基咪唑类药物的检测方法。快速溶剂萃取‑凝胶色谱净化‑LC/MS/MS结合测定蜂花粉中硝基咪唑类药物的方法，该方法样品以乙酸乙酯为萃取溶剂经快速溶剂萃取仪（ASE）萃取，凝胶色谱净化（GPC），采用液质联用多反应监测正离子模式测定，基质匹配标准曲线同位素内标法定量。结果：硝基咪唑类化合物检出限为1.5μg·kg^‑1，定量限为5.0μg·kg^‑1。方法回收率在93.5%～114.2%之间，相对标准偏差在0.3～5.2%之间。结论：该方法具有自动化程度高、灵敏度高，定性和定量结果准确等优点。

主权项

快速溶剂萃取‑凝胶色谱净化‑LC/MS/MS结合测定蜂花粉中硝基咪唑类药物的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：1）标准溶液的制备标准储备液：分别精密称取适量的甲硝咪唑、二甲硝咪唑、洛硝达唑、羟基二甲硝咪唑‑D3、二甲硝咪唑‑D3、洛硝达唑‑D3标准品，用甲醇溶解并定容至25 mL，配置成0.1 mg·mL^‑1的标准储备液；该溶液在4 ℃的冰箱中保存；中间标准储备液：分别准确吸取适量标准储备液，用甲醇逐级稀释成0.1 μg·mL^‑1的中间标准储备液；标准工作溶液：吸取不同体积的中间标准储备液，用空白蜂花粉基质提取液将其稀释成1.0、2.0、5.0、10.0、15.0 ng·mL^‑1的标准工作溶液，其中内标溶液为5.0 ng·mL^‑1，现配现用；2）样品前处理方法准确称取蜂花粉样品2 g，于150 mL烧杯中，精确至0.01 g，加入内标溶液，加入2 g硅藻土，将样品与硅藻土混合均匀，将混和好的样品转移至底部铺有石英砂的萃取池中，上部再铺一层石英砂，加盖拧紧，将萃取池放入快速溶剂萃取仪中进行萃取，萃取液收集于240 mL收集瓶中，将萃取液转移至鸡心瓶中，45 ℃下旋蒸至干；加入10 mL乙酸乙酯‑环己烷溶解残渣，乙酸乙酯‑环己烷体积比1:1，将溶液过0.45 μm的滤膜至GPC样品瓶中，待净化；将经滤膜过滤的溶液使用GPC凝胶色谱仪进行净化，净化条件如下：GPC净化柱，25 mm×400 mm；填料50.0 g Bio‑Beads S‑X3，Bio‑Rad；流动相：环己烷‑乙酸乙酯，体积比1:1；流速：5.0 mL·min^‑1；预洗时间：10 s；杂质丢弃时间：1200 s；收集时间：800 s；冲洗柱子：300 s；进样量：5 mL；收集经净化后溶液5 mL，在45 ℃下氮气吹干，加入1 mL甲醇水溶液，甲醇水溶液中甲醇水的体积比1:9，超声1 min，涡旋混合1 min，过0.22 μm滤膜，供液相色谱‑串联质谱分析；3）液相色谱条件色谱柱：Zorbax Eclipse Plus C18 ，2.1×100 mm, 3.5 um；流动相：A相为0.15%甲酸水溶液；B相为甲醇；柱温 40 ℃；流速：0.3 mL·min^‑1; 进样量5 μL；液相色谱流速及梯度洗脱如下： 4）质谱参数离子源：电喷雾离子化正离子模式；干燥气温度：325 ℃；干燥气流速：5 L·min^‑1；喷雾气压力：45 psi；鞘气温度：400 ℃；鞘气流速：12 L·min^‑1；毛细管电压：4000 V；多反应监测扫描采集参数如下： 5）快速溶剂萃取条件萃取池：20 mL；萃取溶剂：乙酸乙酯；萃取压力：90 bar；萃取温度：90 ℃；保持时间：5 min；溶剂冲洗：30 s；循环次数：2次。