鱼类初期胚胎发育的DAPI染色方法

摘要

本发明公开一种鱼类初期胚胎发育的DAPI染色方法，其特征在于：所述的方法按如下步骤进行：受精10min后开始取卵，每10 min取10‑20个受精卵，取样到四细胞期,用多聚甲醛固定液固定24 h；将固定后的受精卵换入到PBS中浸泡，并在36h后更换一次PBS，于4℃冷藏；取冷藏卵放入事先加入PBS的培养皿中，去除卵膜和植物极，并将动物极放入装有PBS的离心管中，避光；吸出离心管中的PBS，向离心管中加入Tween20和5μg/ml的DAPI染色液，且Tween20和DAPI染色液的体积比为1：100，将离心管放入摇床中进行染色10‑30min。

主权项

一种鱼类初期胚胎发育的DAPI染色方法，其特征在于：所述的方法按如下步骤进行：a.受精10min后开始取卵，每10min取10‑20个受精卵，取样到四细胞期,用多聚甲醛固定液固定24h；所述的多聚甲醛固定液是将利用PBS稀释至2%的戊二醛和多聚甲醛按照1:1的体积比混合后获得的，b.将固定后的受精卵换入到PBS中浸泡，并在36h后更换一次PBS，于4℃冷藏；所述的PBS为：100ml蒸馏水中含有NaCl8g,Na₂HPO₄ ·12H₂O 3g，KCl 0.2g，KH₂PO₄ 0.2g;c.取冷藏卵放入事先加入PBS的培养皿中，去除卵膜和植物极，并将动物极放入装有PBS的离心管中，避光;d.吸出离心管中的PBS，向离心管中加入Tween 20和5μg/ml的DAPI染色液，且Tween 20和DAPI染色液的体积比为1：100，将离心管放入摇床中进行染色10‑30min；所述的DAPI染色剂为DAPI母液和缓冲液按照体积比为1:5的比例混合获得，所述DAPI母液是将10mg DAPI溶在1000ml的蒸馏水中得到的，所述缓冲液为：100ml蒸馏水中含有0.12414g Tris‑HCl、0.37225g EDTA‑2Na及0.5844g NaCl，且缓冲液的pH=7.4。