载多西他赛和莱菔硫烷的自组装纳米粒的制备方法与应用

摘要

本发明涉及医药技术领域，提供了一种载多西他赛和莱菔硫烷的透明质酸修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物自组装纳米粒，及其制备方法与在制备治疗乳腺癌药物中的应用。本发明纳米粒的微观结构包括疏水的PLGA核心和亲水的HA外壳，其中PLGA核心用于包载药物DTX或SFN，而亲水外壳HA可以靶向CD44受体高表达的乳腺癌干细胞。本发明经体外细胞毒性实验表明载药纳米粒比游离药物发挥了更好的抗分化乳腺细胞和乳腺癌干细胞的能力；经体内肿瘤抑制实验表明较游离药物及联用的游离药物更有效，并且系统毒性小。本发明的纳米粒可达到同时靶向分化乳腺癌细胞核乳腺癌干细胞的作用，为乳腺癌治疗提供了一种新策略。

主权项

一种载多西他赛和莱菔硫烷的透明质酸修饰的聚乳酸羟基乙酸共聚物自组装纳米粒的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：A、PLGA‑b‑HA的嵌段共聚物的合成HA的末端经还原胺化形成丁二胺化的HA，然后再和PLGA的琥珀酰亚胺酯形成两亲嵌段共聚物，具体为：(A1)末端胺化的HA的制备：按质量比1:30将HA溶解于pH＝5.6、2％w/w的醋酸/醋酸钠缓冲液中，待HA完全溶解后加入1.0ml的1,4‑丁二胺；50℃磁力搅拌形成亚胺，其后加入五分之一于HA质量的氰基硼氢化钠，然后将pH值调节到弱碱性继续于50℃磁力搅拌，并且在接下来连续两天分别再加入同等质量的氰基硼氢化钠；反应结束后，将反应溶液装入Spectra/Por,MWCO 3500的透析袋中，在去离子水中透析；透析结束将袋内溶液冻干待用；(A2)NHS活化的PLGA的制备：按1:10m/v的比例将PLGA溶解于二氯甲烷中，再分别加入5倍于PLGA摩尔质量的N‑羟基琥珀酰亚胺和1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐，室温下磁力搅拌，反应结束后产物用冰冷的乙醚沉淀，再用冰冷的v/v为50/50的乙醚/甲醇混合液冲洗三次以去除过量的N‑羟基琥珀酰亚胺和1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐，然后将产物真空干燥待用；(A3)PLGA‑b‑HA的合成：精密称取一定量的PLGA‑NHS和1.5倍于PLGA‑NHS摩尔质量的丁二胺化的HA将其分散到一定量的DMSO中最终使PLGA‑NHS的含量为25μg/ml，再加入N,N‑二异丙基乙胺使其最终含量为1μg/ml，然后在50℃下搅拌48小时，反应结束后将该溶液装入Spectra/Por,MWCO 12000‑14000的透析袋中，在去离子水中透析，透析结束将袋内溶液冻干即得PLGA‑b‑HA嵌段共聚物；B、载药PLGA‑b‑HA纳米粒的制备将多西他赛和步骤A制备得到的PLGA‑b‑HA嵌段聚合物按重量比为1:20的比例同时溶解于v/v＝3:1的DMSO/DMF混合溶剂中，磁力搅拌15分钟；然后再缓慢的加入一定量的去离子水，继续搅拌15min后将该溶液转入到Spectra/Por,MWCO 12000‑14000的透析袋中，透析12小时除去有机溶剂，每两小时换水一次；将莱菔硫烷和步骤A制备得到的PLGA‑b‑HA嵌段聚合物按重量比为1:1的比例同时溶解于v/v＝3:1的DMSO/DMF混合溶剂中，磁力搅拌15分钟；然后再缓慢的加入一定量的去离子水，继续搅拌15min后将该溶液转入到Spectra/Por,MWCO 12000‑14000的透析袋中，透析12小时除去有机溶剂，每两小时换水一次；收集载多西他赛的PLGA‑b‑HA纳米粒和载莱菔硫烷的PLGA‑b‑HA纳米粒联用。