一种表面展示PEDV核心抗原COE蛋白重组毕赤酵母菌的制备方法

摘要

本发明涉及动物生物医药工程领域，具体公开了一种表面展示猪流行性腹泻病毒核心抗原COE蛋白重组毕赤酵母菌的制备方法。本发明采用酵母α凝集素表面展示系统来表达PEDV的抗原核心基因COE基因，使COE蛋白锚定在酵母的细胞壁上，提供一种表面展示猪流行性腹泻病毒核心抗原COE蛋白重组毕赤酵母菌的制备方法。该重组毕赤酵母可制备成具有良好产业化前景的新型疫苗产品，随着这些疫苗的推广应用，对养猪业危害严重的病毒性腹泻的预防起到积极的作用，对保护和促进养猪业健康发展具有重要的实践意义，同时亦将取得显著的社会经济效益，拥有广大的市场并具备产业化的前景。

主权项

一种表面展示猪流行性腹泻病毒核心抗原COE蛋白重组毕赤酵母菌的制备方法，其特征在于，以α凝集素作为靶基因将COE蛋白锚定在酵母细胞壁上，具体方法如下：S1. pPICZ α A‑COE‑AGα重组质粒的制备：将凝集素AGα基因片段和pPICZ α载体通过酶切、连接技术构建得到重组质粒pPICZ α A‑AGα；将COE基因片段和重组质粒pPICZ α A‑AGα通过酶切、连接技术构建得到重组质粒pPICZ α A‑COE‑AGα；所述凝集素AGα基因片段和COE基因片段的序列如SEQ IDNO：1~2所示；S2.采用电转化法将pPICZ α A‑COE－AGα重组质粒导入毕赤酵母X33中，获得重组酵母Pichia pastoris X‑33/pPICZ α A‑COE‑AGα；凝集素AGα基因片段的扩增用引物序列如SEQ ID NO：3~4所示，COE基因片段的扩增用引物序列如SEQ ID NO：5~6所示。