犬瘟热-传染性肝炎-细小病毒三联卵黄抗体及其制备方法

摘要

本发明提供了一种犬瘟热‑传染性肝炎‑细小病毒三联卵黄抗体的制备方法，还提供了所述的制备方法制备得到的犬瘟热‑传染性肝炎‑细小病毒三联卵黄抗体。本发明通过收集免疫后的蛋鸡所产的鸡蛋，进行表面消毒，分出蛋黄，匀浆，用无菌蒸馏水稀释，调节pH至5.0‑5.2，静置后收集上清液；上清液用醋酸盐缓冲液稀释，调节pH至5.0‑5.2，加正辛酸，静置分层，取水相离心，取沉淀溶于生理盐水，过滤得到所述卵黄抗体。本发明卵黄抗体的理化性质稳定、来源方便、产量高、成本低，以及动物种系发生学距离的优势，更适于生产特异性抗体，可以用于制备诊断试剂、进行疾病的防治和作为饲料添加剂，具有开发功能性食品和新药的潜能。

主权项

一种犬瘟热‑传染性肝炎‑细小病毒三联卵黄抗体的制备方法，其中，所述方法包括：(1)免疫：将25周龄伊莎蛋鸡饲养7‑10天，用含有犬瘟热病毒、犬传染性肝炎病毒、犬细小病毒的市售多价疫苗免疫经过饲养后的蛋鸡，1.5‑2羽份/只，收集鸡蛋，测定抗体滴度，如果抗体滴度未达到要求水平(1∶512)，再次免疫，并继续收集鸡蛋，测定抗体滴度，直至滴度达到要求水平，并确定免疫次数为3次，收集达到抗体滴度水平的鸡蛋10‑15天；(2)提取：取步骤(1)的滴度达到要求水平的鸡蛋，表面消毒，分出蛋黄，匀浆，用无菌蒸馏水稀释，调节pH至5.0‑5.2，静置后收集上清液；上清液用醋酸盐缓冲液稀释，调节pH至5.0‑5.2，加正辛酸，静置分层，取水相离心，取沉淀溶于生理盐水，过滤得到所述卵黄抗体；其中优选离心是在12000rpm‑13000rpm转速下，在4℃下离心30‑40min；还优选用0.22μm过滤器过滤得到所述卵黄抗体。