基于金标银染信号放大技术的食源性致病菌免疫传感器的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了基于金标银染信号放大技术的食源性致病菌免疫传感器的制备方法及其应用，特点是包括载玻片的硅烷化步骤；将氮化碳材料羧基化后与胶体金溶液搅拌混合得到多功能化氮化碳溶液的步骤；将多功能化氮化碳溶液结合食源性致病菌一抗得到食源性致病菌一抗探针的步骤；在硅烷化载玻片上依次滴上偶联试剂，食源性致病菌二抗、食源性致病菌抗原和食源性致病菌一抗探针，即得到基于金标银染信号放大技术的食源性致病菌免疫传感器，通过添加银染试剂进行定量检测分析，优点是特异性好、灵敏度高、结果准确可靠、成本低、简单快速。

主权项

一种基于金标银染信号放大技术的食源性致病菌免疫传感器的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）载玻片的硅烷化将载玻片置于piranha洗液中，于90～100 ℃加热20‑40 min后取出，用蒸馏水洗涤三次，置于N₂氛中干燥后，浸入硅烷化试剂中室温下硅烷化处理2～6 h，再用乙醇洗净后，于110～130 ℃真空干燥1～3 h后，得到硅烷化载玻片；（2）多功能化氮化碳材料的制备方法a. 将三聚氰胺在500～600 ℃下加热3～5 h，真空干燥后，得到氮化碳粉末；取0.8～1.5 g 氮化碳粉末加入到80～120 mL 4～6 mol/L HNO₃溶液中，于120～150 ℃下回流24～48 h后，自然冷却至室温，水洗涤至pH=7，离心，将沉淀在35～40 ℃下真空干燥12～20 h，得到羧基化的g‑C₃N₄；b. 将80～120 mL 蒸馏水和1～3 mL 1 wt%氯金酸溶液加入到烧杯中，在磁力搅拌下加热至沸腾，迅速加入3～5 mL的1 wt%柠檬酸钠水溶液，继续煮沸直至溶液颜色变成深红色，沸腾状态下继续加热搅拌20 min，得到胶体金溶液，4 ℃密封保存；c. 将30～70 mg 羧基化的g‑C₃N₄加入到 30～70 mL 胶体金溶液中，室温下搅拌16～24 h，然后离心去除固体颗粒，所得溶液即为多功能化氮化碳溶液； （3）抗体探针的制备取步骤（2）制备的多功能化氮化碳溶液200 μL置于玻璃瓶中，加入80～120 μL 10^‑3～10^‑5 mg/mL 食源性致病菌一抗后孵育3～5 h，然后加入80～100 µL 2wt %牛血清白蛋白溶液孵育1～2 h，用蒸馏水清洗离心去除剩余的牛血清白蛋白溶液，即得食源性致病菌一抗探针；（4）食源性致病菌免疫传感器的制备在硅烷化载玻片上滴上4～6 μL 的偶联试剂， 30～50 min后滴上食源性致病菌二抗，孵育30～50 min，然后置于2wt%牛血清白蛋白溶液中孵育20～30 min，然后加入待测食源性致病菌溶液，反应30～50 min后，滴入步骤（3）得到的食源性致病菌一抗探针，反应30～50 min，用超纯水清洗除去残余的探针，即得到基于金标银染信号放大技术的食源性致病菌免疫传感器。