一种细胞水平筛选金属基质蛋白酶抑制剂的方法

摘要

本发明涉及一种细胞水平筛选金属基质蛋白酶抑制剂的方法，包括：(1)设计引物，PCR扩增金属基质蛋白酶的全长cDNA；(2)构建以Retro‑X Tet‑Off为载体的表达体系；(3)将上述构建完成的载体对细胞系进行转染，并筛选阳性克隆，当细胞铺满皿底后，将培养基换为不含DOX的培养基，诱导MMPs的表达；(4)筛选出金属基质蛋白酶抑制剂。本发明建立了一个基于Tet‑off表达系统的，能最大程度模拟MMP的作用环境的方法，用于MMP抑制剂的筛选，相对一般金属基质蛋白酶抑制剂体外筛选更准确。

主权项

一种细胞水平筛选金属基质蛋白酶抑制剂的方法，包括：(1)设计引物，PCR完成扩增金属基质蛋白酶的全长cDNA；(2)将上述扩增的cDNA插入pRetroX‑Tight‑Pur的多克隆位点，构建以Retro‑X Tet‑Off为载体的表达体系；(3)将上述构建完成的表达体系对细胞系进行转染，并筛选阳性克隆，当细胞铺满皿底后，将培养基换成不含四环素的培养基，诱导MMP的表达；(4)设空白对照组、阳性对照组、阴性对照组和不同药物浓度处理组，用细胞膜探针对细胞膜进行染色观察，利用对细胞形态学的分析评估候选待评价药物对MMP的作用。